cAMP 反应元件结合蛋白(CREB)是真核生物中调控基因转录的核心核转录因子,广泛参与细胞增殖、分化、神经可塑性、代谢调节及肿瘤发生发展等多种生理病理过程。CREB 蛋白 S133 位点的磷酸化修饰是其转录活化的标志性分子事件,磷酸化后的 CREB 可与共激活因子结合,启动下游靶基因的转录表达,是 cAMP/PKA、MAPK、CaMK 等多条胞内信号通路的下游汇聚节点。
目前,CREB S133 磷酸化水平已成为神经科学机制研究、肿瘤信号通路解析、靶向药物药效评价的核心检测指标,建立精准、稳定、高通量的定量检测方法,是支撑相关领域科研创新的重要技术基础。
传统磷酸化蛋白检测多采用 Western Blot 技术,但其操作流程繁琐、样本消耗量大、检测通量有限,且实验条件难标准化,批间差异显著,难以满足大规模化合物筛选与多样本定量分析的需求,尤其不适用于转录因子类低丰度蛋白的精准定量。

基于时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)的均相免疫检测技术,有效突破了传统方法的技术瓶颈。该技术采用三明治免疫结合的均相反应体系,无需洗涤步骤,加样孵育后即可直接读取荧光信号,操作流程大幅简化;同时具备样本用量少、灵敏度高、重复性好、可自动化高通量操作的核心优势,现已成为细胞信号通路研究与靶向药物筛选的主流技术方案。

THUNDER™ Phospho-CREB (S133) TR-FRET Cell Signaling Assay Kit 采用三明治 TR-FRET 免疫分析原理,可对细胞裂解液中 S133 位点磷酸化的 CREB 蛋白进行半定量检测,特异性靶向磷酸化修饰位点,有效降低非特异性信号干扰。试剂盒可适配人源与小鼠源样本,覆盖更多实验模型与研究场景。

试剂盒配置完整齐全,包含 Eu 标记磷酸化 CREB 抗体、Acc 标记磷酸化 CREB 抗体、CREB 对照裂解液、裂解缓冲液、TR-FRET 检测缓冲液及磷酸酶抑制剂混合物等全套组分,无需额外配制实验试剂。产品配套标准化实验手册与操作规范,普通实验室无需复杂条件摸索,即可快速搭建稳定的 CREB 磷酸化检测体系。

该试剂盒经多细胞模型多维度实验验证,检测性能稳定可靠。在 NIH3T3 细胞体系中,Forskolin 刺激 CREB 磷酸化呈典型剂量依赖性,EC₅₀为 1.9 μM,信噪比达 2.0;在 A431 细胞体系中,厄洛替尼对 EGF 诱导的 CREB 磷酸化抑制效应明确,IC₅₀为 199 nM,信噪比达 2.4,可精准量化激动剂与抑制剂的作用效能。
检测体系 Z' 因子达 0.61,满足高通量筛选 0.5 的合格阈值,孔间信号波动小、检测窗口稳定,可有效降低化合物筛选中的假阳性与假阴性风险,适配大规模药物初筛与复筛。对照裂解液梯度稀释实验证实,检测信号与样本稀释比例呈良好线性关系,原液信噪比达 7.5,宽线性范围可适配不同蛋白丰度的样本检测。
THUNDER™ Phospho-CREB (S133) 检测试剂盒 依托成熟的 TR-FRET 均相检测技术,兼具操作简便、灵敏度高、稳定性强、跨种属适配、高通量兼容性好等多重优势,为 CREB S133 磷酸化定量检测提供了标准化、高效率的解决方案。产品广泛适用于基因转录调控机制研究、神经可塑性解析、肿瘤信号通路探究、靶向药物筛选与化合物药效评价等多类科研场景,可为相关领域研究提供可靠的技术支撑。
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