1.什么是荧光偏振
Perrin于1926年首先描述了荧光偏振理论，他观察到溶液中的荧光分子在受到偏振光激发时，如果在激发时分子保持静止，该分子将发出固定偏振平面的发射光（发射光仍保持偏振性）。然而，如果溶液中分子发生旋转或翻转，那么发射光的偏振平面将不同于初始激发光的偏振平面（去偏振化）。偏振化程度与荧光分子的运动状态、与其他分子的相互作用、溶液温度、粘度等有关系。

FP 广泛用于监测溶液中的分子的相互作用，并为化合物和靶标的直接或竞争性结合分析提供依据。FP 检测兼容高通量检测，因此特别适合于药物筛选。

荧光偏振原理图

2.为什么荧光分子激发后产生的发射信号会有去偏振的现象呢？
溶液中荧光分子旋转是布朗运动造成的，荧光探针的光偏振程度与布朗运动成反比。因此，FP 受改变分子旋转和随机运动的所有参数的影响，如分子大小、形状（球体旋转更快）、溶剂粘度和温度等。当温度和粘度保持恒定时，分子大小则成为影响 FP 的主要因素。

单独的荧光分子，它的荧光寿命相对旋转时间要大很多，快速旋转将导致信号消偏。反之，当荧光分子结合大分子以后，旋转时间变长。发射光保持和激发光相同的偏振性。偏振水平低表明荧光小分子在样品中自由移动。偏振水平高表明荧光分子附着在较大的分子复合物上。

τ：荧光分子激发后的荧光寿命，一般为ns级别。
θ：分子旋转时间（溶液中分子旋转是由于布朗运动，与分子量、粘度、温度等因素相关）

3.荧光偏振应用
FP 广泛用于检测溶液中大分子和小分子的相互作用，通常是小分子做荧光标记。如：

• 小分子药物的高通量筛选
• 抗体与小抗原（表位）的结合
• 蛋白质-DNA 和蛋白质-RNA 相互作用
• 酶促反应：底物与酶结合或形成新产物

4.荧光偏振技术对酶标仪的要求
FP对设备有一定的要求，需要偏振器（获得偏振光）和检偏器（检测偏振光）。在FP检测过程中，激发光会经过偏振器，其他方向的光被过滤掉，通过偏振器的光是沿着传播方向的单平面光，即偏振光。

Nivo多功能酶标仪通过偏振器获得线性偏振光

通过检偏器在垂直和水平方向检测偏振发射光光强，从而计算荧光物质发射荧光的偏振值，通过专用软件分析，可对结果进行分析。

荧光偏振值用P表示：

其中(I垂直)和(I水平) 表示发射荧光在垂直和水平方向的强度，偏振值一般以mP（毫偏）表示。对于完全偏振光P=1，对于自然光P=0，偏振值可以衡量荧光分子的运动性。