过氧化氢酶检测试剂盒，K-CATAL
简介：
过氧化氢酶（EC 1.11.1.6）是一种重要的抗氧化酶，负责降解活性氧物种过氧化氢。它在含有细胞色素系统的哺乳动物和非哺乳动物细胞中广泛表达。过氧化氢酶催化过氧化氢分解成水和氧气。
过氧化氢（H2O2）是细胞内发生的各种氧化酶和超氧化物歧化酶反应的副产物，是细胞代谢的正常产物。H2O2的积累对细胞极其有害，可能导致细胞蛋白质、脂质和DNA的氧化。这种氧化损伤最终会导致DNA突变和细胞死亡。为了防止这种损伤并存活，细胞依赖于包括过氧化氢酶在内的各种抗氧化剂。
在商业上，H2O2可以用作杀菌剂来抑制微生物生长，例如在乳制品行业。它还在纺织工业中用于织物的漂白等。在这些行业（和其他行业）中，残留的H2O2可以通过过氧化氢酶处理去除，以防止产品污染。
该试剂盒提供了一种简单的比色法来检测过氧化氢酶活性。该方法以快速可靠的形式提供，可用于检测各种样品中的过氧化氢酶活性，包括食品、生物和细菌样品。传统上，过氧化氢酶活性是通过观察240 nm处H2O2吸光度的降低来测量的。在这个紫外光区域内，可以观察到蛋白质和其他生物成分的干扰。目前的分析提供了利用可见光（520 nm）的显著优势，这减少了可能的样品干扰。
由于已知H2O2在浓度高于100 mM时会灭活过氧化氢酶，因此该测定采用约65 mM的测定底物浓度，并在活性计算中考虑确切的H2O2浓度，以最大限度地提高测定的准确性和可重复性。
原理：
通过测量分析物样品与H2O2标准溶液孵育后观察到的H2O2浓度的降低来确定样品中的过氧化氢酶活性。
为了使用Megazyme过氧化氢酶检测试剂盒测定过氧化氢酶活性，必须完成两个单独的反应。
在反应A中，将感兴趣的过氧化氢酶样品与已知浓度（在测定中约为65 mM）的H2O2一起孵育。通过加入15mM叠氮化钠来停止反应，叠氮化钠强烈抑制过氧化氢酶。
反应 A:
Catalase
2H2O2 ——> 2H2O + O2
在反应B中，使用3,5-二氯-2-羟基苯磺酸（DHBS）、4-氨基安替比林（AAP）和过氧化物酶的酶联比色检测方法测量剩余H2O2的确切浓度。在520nm下测量所得醌亚胺染料。
Peroxidase
并行进行“空白”反应，以提供初始H2O2浓度的比色响应。
套件：
适用于进行100（3 mL比色皿规模）或200（1.5 mL比色杯规模）的测定。试剂盒包含：
瓶1: 1.5 M磷酸钾缓冲液（30 mL，pH 7.0）加叠氮化钠（0.02%w/v）作为防腐剂。
在4℃下稳定4年以上。
瓶2：过氧化物酶加4-氨基安替比林和稳定剂。以冻干粉末形式运输。
在-10ºC以下稳定4年以上。
瓶3: 3,5-二氯-2-羟基苯磺酸（DHBS）溶液（20 mL）加叠氮化钠（0.02%w/v）作为防腐剂。
在4℃下稳定4年以上。
瓶4：过氧化氢（H2O2）标准溶液（10 mL，~1.3 M）避光。在4℃下稳定2年以上。
瓶5：过氧化氢酶标准品（4克），来自黑曲霉（约1.6 U/mg）。小瓶上标明的实际U/mg。储存温度低于-10ºC。尽量减少冷冻/解冻气瓶。在-10ºC以下稳定2年以上。
注：
1.请确保按照以下所述的确切顺序准备试剂。不遵守此程序将导致DHBS不可逆转地沉淀。
2.瓶子1和3含有0.02%（w/v）叠氮化钠。这是一种有毒的化学物质，应该进行相应的处理。
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