镍离子螯合亲和层析柱
产品编号：Ni-C-01/ Ni-C-02/ Ni-C-05/ Ni-C-70/ Ni-C-150
产品规格：1 mL/ 2 mL/ 5 mL/ 70 mL/ 150 mL
稳 定 性：层析填料于20 %乙醇中
保 存：4~
u 产品简介
本制品设计的镍离子金属螯合亲和层析介质为Ni-IDA配体，既具有特异性好、螯合镍更稳定，镍离子脱落少，使用寿命长的优势，又具有基础层析介质颗粒粒度均匀，流速快的优点，并且物理和化学稳定性好，能耐受更高浓度的还原剂、变性剂和去垢剂，批次重复性好，质量稳定。本产品已经螯合好镍离子，使用更方便。
u 适用范围
分离His融合蛋白及能被金属离子吸附的多肽、蛋白、核苷酸、磷酸化蛋白。
u 注意事项
请在实验前仔细阅读本镍离子螯合亲和层析柱使用说明；本制品性能参数见附表。
u E.coli表达His-tag可溶性重组蛋白纯化操作说明
1. 缓冲液配制
u 基础缓冲液：准确称取
注：不同蛋白应根据其等电点选择不同pH的基础缓冲液，如pH 8.0的Tris-HCl缓冲液等。
u 平衡缓冲液：
u 洗脱缓冲液：
u 脱镍缓冲液：
2 样品预处理：按每克湿重菌体4~5 mL平衡缓冲液充分悬浮离心收集的菌体，经破碎、离心后，收集上清液得到粗蛋白液，用0.45 μm滤膜过滤，待上样。
3. 清洗：将镍离子螯合亲和层析柱固定好，用3~5倍柱体积去离子水洗柱，除去保存液；
4. 平衡：用3~5倍柱体积平衡缓冲液平衡层析柱；
5. 上样：将预处理好的样品从层析柱上端缓慢加入，为了获得更好的目的蛋白结合效果可将流穿液再上样，重复2次（或者是将样品一次性加入层析柱后置于摇床上，轻轻摇动，结合30 min）；
6. 洗涤：用3~5倍柱体积平衡缓冲液洗去层析柱中未结合的样品蛋白；
7. 洗脱：用基础缓冲液和洗脱缓冲液配制的不同浓度的缓冲液洗脱，选用以下2种方案洗脱：
u 最高纯度洗脱方案：用含20、50、100、150、200、500 mM咪唑的缓冲液分步洗脱，每个梯度3~5倍柱体积洗脱；
u 最高收率洗脱方案：先用5~10倍介质体积含
注：纯化过程流速不宜过快，对于1 mL介质，流速保持在0.5 mL/min为宜；确保介质一直浸泡于溶液中。
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