一、背景介绍
  变性高效液相色谱（Denaturing High Performance Liquid Chromatography，DHPLC）是一种新的高通量筛选DNA序列变异的技术，其原理是利用离子对反向高效液相色谱原理，通过一个DNA分离柱，进行核苷酸片段的分离和分析。该方法具有自动化、快速、检出率高、检测DNA片段大小范围广等优点。
  二、操作方式及适用范围
  DHPLC能以三种方式操作，不同的操作方式采用的原理不同，其适用的范围也不同。
1、不变性温度条件下（50℃），色谱仪类似凝胶电泳仪，可分离分子量不同的双链DNA分子或分析具有长度多态性的片段，类似RFLP分析，也可进行定量RT-PCR及微卫星不稳定性测定（MSI）。
2、在充分变性温度条件下（80℃），单链DNA或RNA分子能被区分，适用于寡核苷酸探针合成纯度分析和质量控制。
3、在部分变性的温度条件下，变异型和野生型的PCR产物经过变性复性过程，不仅分别形成同源双链，同时也错配形成异源双链，根据柱子保留时间的不同将同源双链和异源双链分离，从而识别变异型。根据这一原理，可进行基因突变检测、单核苷酸多态性分析（SNPs）和短片段串联重复序列分析（STRs）。
  三、以基因突变检测为例，简述使用步骤及注意事项
1、DNA的分离和提取：DNA可以是组织或外周血来源，一个PCR反应需50ng DNA。
2、引物的选择和设计：进行基因突变检测和SNP分析时，PCR括增的片段不要太长，最适长度为150-450bp 。
3、PCR扩增：PCR产物纯度要高，不能有非特异条带，PCR产物不需纯化，直接进行分析，使用的DNA聚合酶尽量用高保真聚合酶，反应体系中不能含有BSA、DMSO等大分子物质（上述步骤在本科室完成）。
4、 HPLC系统进行检测。
5、测序验证：选择不同类型的峰型进行测序验证。