货号：PC1100
规格：500U/1000U/2500U
浓度：5U/ul
保存：-20℃保存, 有效期至少一年。
产品简介： Taq DNA Polymerase是从克隆有Thermus aquaticus DNA Polymerase基因的大肠杆菌经诱导表达后分离纯化的，其分子量为94 KD。该酶具有5’-3’DNA聚合酶活性和5’-3’核酸外切酶活性，无3’-5’外切酶活性。在PCR反应中，Taq DNA Polymerase延伸速度为1-2 kb/分钟，产物3’端带A，可直接用于T/A载体克隆。该酶无外源核酸酶和细菌基因组DNA的污染，稳定性好，特异性强。
活性定义： 1单位(U) Taq DNA Polymerase活力定义为在74℃，30分钟内，以活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板，将10 nmol脱氧核苷酸掺入到酸不溶物质所需的酶量。
质量控制： SDS-PAGE检测Taq DNA Polymerase纯度大于99%；经检测无外源核酸酶活性；PCR方法检测无宿主残余DNA；能有效地扩增人类基因组中的单拷贝基因；室温存放一周，无明显活性改变。
酶贮存缓冲液： 20mM Tris-HCl (pH 8.0); 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 100 mM KCl ; 50% glycerol; 稳定剂
适用范围： 用于小于6kb的对保真度要求不高的DNA片段的PCR扩增、DNA标记、引物延伸、序列测定、平末端加A等，产物可以直接用于T/A载体克隆。

PCR MasterMix说明书

保存：-20℃保存，有效期12个月，4℃短期保存一周，避免反复冻融。
产品简介： 索莱宝公司生产的PCR MasterMix包含三种酶(Taq，Pfu，Taq plus)，每种酶对应着两种PCR MasterMix（含染料和不含染料），一共六种PCR MasterMix。
Taq：扩增效率最高的耐热DNA聚合酶，其扩增速度约为1-2kb/min。扩增碱基出错率为10-5左右。其产物未端带有A，可直接用于TA克隆。 Pfu：目前保真度最高的耐热DNA聚合酶，碱基出错率为10-6，但扩增效率低于Taq酶，一般能很好的扩增2kb以下的片段。其扩增速度约为500bp/min左右。其产物为平未端，须加A后才可用于TA克隆。 Taq Plus：Taq和Pfu的等比混合物。集扩增效率高和保真度好于一身。扩增效率比Pfu高，保真度比Taq好。其扩增速度约为1000bp/min左右。其产物未端带有A，可直接用于TA克隆。含染料PCR MasterMix反应完后可以直接电泳检测。不含染料的PCR MasterMix反应完后加入上样缓冲液后电泳检测。产品组成(2×)： 20 mM Tris-HCl (pH 8.3) 100 mM KCl 3mM MgCl2 500uM dNTP each 0.1U Polymerase/ul ddH2O 其它稳定剂和增强剂
应用举例：
1、按下面配制50ul PCR反应体系

      
2、PCR反应循环设置

3、结果检测：反应结束后，取5ul反应产物，琼脂糖凝胶电泳检测。

 Taq DNA聚合酶

      Taq DNA聚合酶是从水生栖热菌(Thermusaquaticus)YT1株分离提取的。YT1是一种嗜热真菌，能在70～75℃生长。该菌是1969年从美国黄石国家森林公园火山温泉中分离的。

 (一) 酶活性与热稳定性

该酶基因全长2496个碱基， 编码832个氨基酸，酶蛋白分子量为94Kda。其比活性为200000单位/mg。75～80℃时每个酶分子每秒钟可延伸约150个核苷酸，70℃延伸率大于60个核苷酸/秒，55℃时为24个核苷酸/秒。 温度过高(90℃以上)或过低(22℃)都可影响Taq DNA聚合酶的活性，该酶虽然在90℃以上几乎无DNA合成，但确有良好的热稳定性，在PCR循环的高温条件下仍能保持较高的活性。在92.5℃、95℃、97.5℃时，PCR混合物中的Taq DNA聚合酶分别经130min，40min和5～6min后，仍可保持50%的活性，实验表明。PCR反应时变性温度为95℃～20sec，50个循环后，Taq DNA聚合酶仍有65%的活性。Taq DNA聚合酶的热稳定性是该酶用于PCR反应的前提条件，也是PCR反应能迅速发展和广泛应用的原因。     

Taq DNA聚合酶还具有逆转录活性，其作用于类似逆转录酶。此活性温度一般为65～68℃，有Mn2+存在时，其逆转录活性更高。

在-20℃的条件下，Taq DNA 聚合酶至少可保存12个月。

 (二)PCR反应缓冲液

    PCR缓冲液中的Tris-HCl(10-50 mmol/L)是一种双极化离子缓冲液，主要作用是维持偏碱性的Taq作用环境。

Taq DNA聚合酶是Mg2+依赖性酶，Mg2+浓度可显著影响该酶的催化活性及催化产物。

一般用量为1.5~2.0 mmol/L，浓度过高则出现非特异性扩增，过低则酶活力显著下降。由于反应体系中的dNTPs、引物、模板DNA及产物均可结合Mg2+，从而降低Mg2+浓度。故本公司的产品将Mg2+单独提供，在不同的反应体系中可以适当调整，优化浓度。

适当浓度的KCl能使Taq DNA聚合酶的催化活性提高50～60%，其最适浓度为20~50mmol/L，高于75mmol/L时明显抑制该酶的活性。

在反应体系中加入10%的DMSO(二甲基亚砜)，可以减少模板的二极结构，甲酰胺及氯化四甲基胺均可提高反应的特异性。

低浓度的NP-40(0.05%)和Tween-20(0.05%)能增强Taq DNA聚合酶的活性。低浓度SDS对该酶的抑制作用可加入一定浓度的NP-40和Tween-20抵消。

 (三)忠实性

Taq DNA聚合酶具有5'→3'聚合酶活性和5'→3'外切酶活性，而无3'→5'外切活性，它不具有Klenow酶及pfu酶的3'→5'校对活性。因而，在PCR反应中如发生某些碱基的错配，该酶是没有校正功能的。Taq DNA聚合酶的碱基错配机率约为2.1×10-4。

  (四)抑制剂

    低浓度的尿素、甲酰胺、二甲基甲酰胺(DMF)和二甲基亚砜(DMSD)对Taq DNA聚合酶的催化活性并无影响。极低浓度的离子表面活性剂如脱氧胆胺酸钠(小于0.06%)，十二烷基肌氨酸钠(小于0.02%)，十二烷基硫酸钠(SDS，小于0.01%)几乎可完全抑制该酶的活性。而非离子表面活性剂在较高浓度(Tween20，NP-40.和Tritox-100)如>5%时方能抑制该酶的活性。
 

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