产品及特点

本产品是基于荧光染料检测的即用型双酶一管式RT-PCR试剂盒，可以对靶片段进行实时定量RT-PCR分析（quantitative RT-PCR、qRT-PCR）。产品含有经过优化的缓冲液组分、MMLV-Taq DNA聚合酶混合物、dNTPs、MgCl2及新型荧光染料DNAgreen等所有一管式实时定量RT-PCR所需要的成分，用户只需加入RNA模板和引物即可进行实时定量RT-PCR反应，具有广泛的用途。

• 一管式完成qRT-PCR反应，避免样品交叉污染，尤其适合临床应用。
• 即开即用，用户不需要单独准备qRT-PCR所需的各种试剂。
• 主要成分只有两个（RT-PCR buffer和MMLV-Taq Mix），将加样步骤减少到最低，极大降低了加样误差，增加了可重复性。
• 使用范围广，适用于从病毒RNA到人RNA的各种RNA模板。
• 高灵敏度，每个RT-PCR体系最低可以检测200拷贝的RNA分子，可扩增的模版RNA的最长达2000 nt。

规格及成分

运输及保存

低温运输，-20℃保存, 保存期限为一年。

自备试剂

RNA模板、引物。有的机型需要自备ROX。

使用方法

• 在一干净的无RNase的PCR管中，先加入下列成分（下面只列出样品管的设置情况，用户可自己根据需要设置阳性和阴性对照）：

注1：通常初次使用本试剂时，可用引物浓度300nM进行实验，根据实验结果具体情况，在200～800nM范围内调整引物浓度。引物、待检样品的具体加量用户可以根据实际情况调整，同时增减RNase-free水用量，保证总反应体积不变即可。

注2：如果使用ABI公司的7500，7700和7900三种型号的荧光PCR仪器，则需用自备的ROX进行Ct值校正。对ABI 7700和7900，ROX的最佳浓度为1×（即在每30 uL 反应体系中加3 uL 10×ROX）。对ABI 7500， ROX的最佳浓度为0.05-0.1×（每30 uL 反应体系加0.3 uL 10×ROX；也可将10×ROX稀释到1×，然后每个反应体系加入3 uL 1×ROX）。ROX会在溶解曲线中产生噪音，因此，如果出现了杂峰，将软件中“Passive Reference Dye”中的“ROX”选项取消打勾，然后重新分析数据。对于iCycler IQ, MJ Opticon, MJ Chromo4, MX3000, MX4000, RotorGene3000, RotorGene 6000 和 LightCycler 480等型号的荧光PCR仪器，ROX不是必须的，但加入的话也不会影响整个PCR分析。

• 轻柔混合均匀后放入PCR仪中进行荧光定量RT-PCR。
• 设定RT-PCR反应条件时，一般将RT的条件设定成42℃ 30分钟，后接94℃变性5分钟，然后进入PCR循环（PCR参数将根据自备引物的Tm值和PCR产物长度由用户自行决定注）、最后72℃ 5分钟。并在退火或延长步骤中记录荧光信号。本产品中所含的荧光染料在没结合DNA时，最大吸收光谱在471nm，结合DNA时的最大吸收光谱在500nm，最大发射光谱在530nm。

关联产品

即用型荧光定量PCR试剂盒、PCR级绿如蓝染料。