5'RACE试剂盒--性能参数，报价/价格，图片

基本信息

产品名称：

5'RACE试剂盒

英文名称：

5′-RACE Kit

国产/进口：

国产

产地/品牌：

北京

型号：

CAT#:101105-10 低温运输

参考报价：

1900

销售商：

北京天恩泽生物技术有限公司

总点击数：

1317

更新日期：

2015-05-21

产品类别：

分子生物学试剂

性能参数

产品及特点

研究真核基因的最基础的工作之一就是确定其转录终止位点，目前最通用的方法是5′-RACE法，RACE（Rapid Amplification of cDNA Ends）是Frohman发明的、通过PCR快速克隆cDNA末端的技术，它在不建立cDNA文库的前提下，利用已知cDNA序列设计引物，通过往两端延伸和扩增获得其5′-端序列。本试剂盒就是根据5′-RACE原理而开发，它具有下列特点：

即开即用，客户不需要单独准备各种材料。
反应条件经过精心优化，包括使用无RNase H活性的MMLV和优化的引物。

5′-RACE的原理如下图：

规格及成分

成分	10 次塑料袋包装
MMLV逆转录酶-RI混合液（RNase H-，200 U/μL）	10 μL
MMLV Buffer-dNTP混合液	60 μL
微量核酸沉淀剂	400 μL
TdT（末端转移酶）	10 μL
2×TdT Buffer（含dATP）	100 μL
PCR MagicMix 3.0	1.5 mL
5′-RACE引物A-引物B混合液	100 μL
5′-RACE引物C	100 μL
RNase-Free水	1 mL
使用手册	1份

自备试剂

Poly(A) RNA（或总RNA）、基因专一性引物A、B、C、75%乙醇。注意：自备的基因专一性引物A，B，C的相对位置应该跟本手册产品介绍中的示意图一致。

运输及保存

低温运输、-20℃保存、有效期一年。

使用方法

1. 变性模板RNA：将1 μg mRNA或5 μg 总RNA加入到一个RNase-free的PCR管中，补RNase-Free水到9 μL，65℃保温5分钟后短暂离心，立即放冰上待用。如果RNA浓度偏低，体积超过9 μL,可以使用本公司的核酸浓缩剂（需另购,产品编号为110801-30）浓缩到所需的体积。

2. 设置RT反应（用户可以根据需要设阴性对照）：在上步的含变性后的RNA模板的PCR管中，按顺序加入：

成分	用量
自备的基因专一性引物A（10 μM）	4 μL
MMLV Buffer-dNTP混合液	6 μL
MMLV逆转录酶-RI混合液	1 μL
合计	20 μL

3. 37℃保温60分钟， 42℃保温30分钟， 50℃保温10分钟，最后75℃保温10分钟使逆转录酶变性。

4. 短暂离心5秒后待用。

5. 在PCR管中加入40 μL微量核酸沉淀剂（本产品含不溶的核酸助沉剂，用前需要充分摇匀再取用），震荡混匀。

6. 室温12000 rpm离心15分钟，小心吸弃上清。

7. 加入1mL 自备75%乙醇，室温12000 rpm离心5分钟，小心吸弃上清。

8. 短暂离心数秒，小心吸弃残留液体后，稍微晾干后加入10 μL RNase-free水，充分吹打溶解，得到cDNA溶液。注意：为保证加尾效率，溶解cDNA的RNase-free水最好不要超过10 μL。

9. 加尾反应：在10 μL cDNA溶液中加10 μL 2×TdT Buffer（含dATP）和1 μL TdT酶，轻柔吹打混匀。

10. 37℃保温15分钟进行加尾反应，然后75℃保温3分钟灭活末端转移酶。

11. 加入0.5 mL RNase-free水稀释加尾反应体系。此稀释液将作为PCR的模板。

12. 第一轮PCR：用不同量的稀释后的加尾反应液设置PCR反应（样品组最好设用量梯度，单位：μL）。

成分	梯度1	梯度2	梯度3	梯度4
PCR MagicMix 3.0	25	25	25	25
自备基因专一性引物B（10 μM）	2.5	2.5	2.5	2.5
5′ RACE引物A-引物B混合液	2.5	2.5	2.5	2.5
稀释后的加尾反应液	1	5	10	15
RNase-free水	19	15	10	5
合计	50	50	50	50

13. 按下列条件进行PCR（注：应根据实际情况选择适当的退火温度）。

第1次循环：94℃ 5分，48-52℃ 2分，72℃ 4分

第2-30次循环：94℃ 40秒，52-60℃ 1分，72℃ 3分

最后延伸：72℃ 15分

14. 取10-20μL PCR产物进行琼脂糖电泳电泳检查PCR结果，如果一条清晰的条带，则可以不做后续的第二轮PCR，而直接进行DNA测序或TA克隆。

15. 第二轮PCR：如果第一轮PCR没有一条清晰的条，则带从4管PCR产物中各取1μL分别加入到20 μL RNase-free水中进行稀释，然后各取1 μL分别作为4管第二轮PCR的模板：

成分	用量
第一轮PCR产物的稀释液	1 μL
PCR MagicMix 3.0	25 μL
5′ RACE引物C	2.5 μL
自备基因专一性引物C（10 μM）	2.5 μL
RNase-free水	补至50 μL
合计	50 μL

16. 按下列条件进行PCR：第1-30次循环（94℃ 40秒，52-60℃ 1分，72℃ 3分），最后延伸：72℃ 15分

17. 取10-20μL 第二轮PCR产物进行琼脂糖电泳，一般都会有一个样品有清晰的条带出现，则可以直接进行DNA测序或TA克隆。

关联产品

3′-RACE试剂盒（CAT#：101104），改良型5′-RACE试剂盒（CAT#：110301）

公司简介

北京天恩泽生物技术有限公司拥有国内最齐全的核酸纯化类产品线，专门从事分子生物学试剂的研究、开发和销售，承接各种定向产品开发、OEM生产和分子生物学技术服务，包括疑难样品的核酸纯化、PCR、克隆、DNA测序、引物合成和全基因合成。

北京天恩泽是由留美十年的归国博士徐堤先生2004年底创建。徐堤博士1985年毕业于四川大学遗传学专业并获得遗传学学士学位，1991年毕业于北京协和医科大学（即后来的中国协和医科大学）并获得生物化学硕士学位，参与过地贫基因的PCR和测序工作。1997年毕业于美国德克萨斯州University of Texas Medical School并获Microbiology and Molecular Genetics博士学位。1998-2001在美国加州Roche Molecular Systems，Inc.（瑞士Roche药业集团购买Cetus公司及其PCR专利后专门成立的开发PCR临床诊断产品的子公司）担任开发部Principal Scientist和HBV血筛项目经理（2000-2001年），对分子生物学产品的开发有丰富的实战经验。

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