hCMEC/D3永生化人脑微血管内皮细胞    hCMEC/D3(永生化人脑微血管内皮细胞)    
    【细胞货号】    C0447
    【细胞缩写】    hCMEC/D3细胞
    【细胞名称】    hCMEC/D3(永生化人脑微血管内皮细胞)
    【背景资料】    见细胞说明书
    【细胞来源】    细胞主要来源ATCC、hCMEC/D3永生化人脑微血管内皮细胞DSMZ、ECACC、RIKEN、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国内外著名大学建系
    【代次】    P4
    【规格】    复苏T25培养瓶(一瓶)或冻存1ml冻存管（两支）
    【细胞数】    1*10（6）
    【生物安全级别】    1
    【生物体】    人
    【组织来源】    大脑；组织：血脑屏障
    【细胞形态】    内皮
    【细胞特性】    贴壁
    【细胞活力】    95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）
    【细胞检测】    细胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌
    【培养条件】    详见细胞说明书
    【传代方法】    建议1:2-1:3 两天换液一次
    【冻存条件】    详见细胞说明书
    【主要文献】    请具体查阅相关发表文章

一、DMSO之等级和无菌过滤之方式为何？
冷冻保存使用的DMSO等级，必须为Tissueculturegrade的DMSO(如SigmaD2650)，其本身即为无菌状况，第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中，保存于4°C，避免反复冷冻解冻造成DMSO之裂解而释出有害物质，并可减少污染之机会。若要过滤DMSO，则须使用耐DMSO之Nylon材质滤膜。
二、冷冻保存细胞之方法？
冷冻保存方法一:冷冻管置于4°C30-0分钟→(-20°C30分钟*)→-80°C16~18小时(或隔夜)→hCMEC/D3永生化人脑微血管内皮细胞液氮槽vaporphase长期储存。
冷冻保存方法二:冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3°C至–80 °C以下，再放入液氮槽vaporphase长期储存。
*-20°C不可超过1小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80°C冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
三、细胞欲冷冻保存时，细胞冷冻管内应有多少细胞浓度？
冷冻管内细胞数目一般为1x106cells/mlvial，融合瘤细胞则以5x106cells/mlvial为宜。
四、 应如何避免细胞污染？
细胞污染的种类可分成细菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉浆菌。主要的污染原因为无菌操作技术不当、操作室环境不佳、污染之血清和污染之细胞等。严格之无菌操作技术、清洁的环境、与品质良好之细胞来源和培养基配制是减低污染之最好方法。
五、如果细胞发生微生物污染时，应如何处理？
直接灭菌后丢弃之。 
六、支原体(mycoplasma)污染的细胞，是否能以肉眼观察出异状？
不能。
除极有经验之专家外，大多数遭受支原体污染的细胞株，无法以其外观分辨之。 
七、支原体污染会对细胞培养有何影响？
hCMEC/D3永生化人脑微血管内皮细胞支原体污染几乎可影响所有细胞之生长参数，代谢及研究之任一数据。故进行实验前，必须确认细胞为mycoplasma-free，实验结果之数据方有意义。
八、侦测出细胞株有支原体污染时，该如何处理？
直接灭菌后丢弃，以避免污染其它细胞株。 
九、CO2培养箱之水盘如何保持清洁？
定期(至少每两周一次)以无菌蒸馏水或无菌去离子水更换之。
十、为何培养基保存于4°C冰箱中，颜色会偏暗红色，且pH值会越来越偏碱性？
培养基保存于4°C冰箱中，培养基内之CO2会逐渐溢出，造成培养基越来越偏碱性。而培养基中之酸碱指示剂(通常为phenolred)的颜色也会随碱性增加而更偏暗红。培养基偏碱之结果，将造成细胞生长停滞或死亡。若培养基偏碱时，可以通入无菌过滤之CO2，以调整pH值。或加入稀盐酸调整PH值。

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