带his标签蛋白纯化镍螯合预装柱
金属螯合高流速琼脂糖凝胶（IDA）
金属螯合高流速琼脂糖凝胶（IDA）是将亚氨基二乙酸基键合在高流速6B琼脂糖凝胶上，再螯合金属离子Zn2+或Ni2+形成的一种亲和层析介质，利用样品组分中的组氨酸等氨基酸残基与金属离子的亲和吸附进行分离纯化。该产品若不螯合金属离子为白色球状凝胶，若螯合不同金属离子则显现不同颜色，无嗅、无味、无肉眼可见杂质。
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镍螯合高流速琼脂糖凝胶产品说明书
1、产品介绍：金属镍螯合高流速琼脂糖凝胶是将亚氨基二乙酸基键合在高流速6B琼脂糖凝胶上，再螯合金属离子Ni2+形成的一种亲和层析介质，利用样品组分中的组氨酸等氨基酸残基与金属离子的亲和吸附进行分离纯化，应用于分离能被金属离子吸附的多肽、蛋白、核苷酸、磷酸化蛋白及带 His 标签的重组蛋白。
2、规格1ml（预装柱）、5ml（预装柱）
3、性能介绍：
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产品牌号 |
金属螯合高流速琼脂糖凝胶（IDA）
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配基 |
-N（CH2COOH）2 |
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基质 |
Seplite6FF |
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形状 |
球形 |
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粒径（μm） |
50~160 |
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离子结合量 |
（Ni2+）（μmol/ml）：20~40 |
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最高流速（25℃）（cm/h） |
≧370 |
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耐压（MPa） |
0.3 |
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耐热 |
pH7.0水中120℃20min |
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pH适用范围 |
2~14 （短时间）；3~13（长时间） |
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化学稳定性 |
以下溶液中稳定：1mol/L 氢氧化钠；20%乙醇； 0.01mol/L盐酸。 |
4、使用方法
对于通过AKTA纯化系统纯化，可直接连接预装柱使用：对于一般紫外检测，可通过产品附带的鲁尔接口将蠕动泵、橡胶管、鲁尔接口、预装柱、紫外检测器连接，操作简单，快捷。
①平衡
镍螯合琼脂糖凝胶柱用2~5个柱体积的初始缓冲溶液进行平衡。
建议线性流速为100 cm/h。（线性流速=体积流速×60÷柱横截面）
②上样
（1）样品一般溶解于pH6~8 的初始缓冲液中。提高上样缓冲液的pH 值可以增大载量。
（2）缓冲液中不能含有EDTA和柠檬酸盐，同时最好避免巯基乙醇、DTT等还原剂。
（3）常用缓冲液有10~100 mM磷酸钠缓冲液、20~200 mMTris-HCl缓冲液等。
（4）缓冲液中一般要加入0.15~0.5 M的NaCl以消除离子交换作用。
（5）初次使用镍螯合琼脂糖凝胶时，推荐使用50mM PBS（50 mM NaH2PO4，0.5 M NaCl,pH 7.4）作为初始缓冲液。
③洗脱
（1）增加咪唑浓度进行洗脱是镍螯合琼脂糖凝胶最常用的洗脱方法。
（2）咪唑为碱性，相应缓冲液配制后需要用HCl调节pH值。
（3）初次使用镍-琼脂糖凝胶FF时，如不确定洗脱需要的咪唑浓度，推荐在初始缓冲液中分别加入10 mM、20 mM、50 mM、100 mM、200 mM、500 mM咪唑，浓度从低
到高分别洗脱和收集重组蛋白，之后通过SDS-PAGE电泳等方法鉴定洗脱结果。
（4）有条件的可以进行咪唑梯度线性洗脱以确定较佳的洗脱条件。
洗脱方法
（1）降低pH洗脱：大多数蛋白在pH6~4会被洗脱下来（也可以在pH 3~4），缓冲液可以是醋酸钠、柠檬酸和磷酸盐缓冲体系。
（2）竞争性洗脱：线性增加或一步增加同金属离子有亲和力的竞争物质的浓度（如0~0.5M咪唑、0~50 mM组氨酸、0~2M NH4Cl）。梯度洗脱最好在起始缓冲液的恒定pH值下进行。
（3）螯合剂洗脱：EDTA、EGTA 等螯合剂可同金属离子产生作用力，导致蛋白被洗脱下来。此法不能分离不同的蛋白，还会影响蛋白的吸附，导致融合蛋白无法挂柱。
注：降低pH洗脱和螯合剂洗脱会使得金属离子脱落，下次使用前需要重新螯和金属离子。最常用的方法为竞争性洗脱。
上述洗脱方法，均须在缓冲液中加入150 ~500mM的NaCl以消除离子交换作用。
5、再生、清洗、保存
①凝胶再生
（1）多次使用后或需要更换螯合的金属离子时，必须将凝胶脱镍再生。脱镍方法：用5~10个柱体积的蒸馏水淋洗柱子，再用5~10个柱体积的100 mM EDTA淋洗柱子，最后用2~3个柱体积的0.5 M NaCl洗掉残留的EDTA。
（2）多次使用的柱子脱镍后一般需要进行清洗。清洗方法：用0.1~1.0 M NaOH反向清洗柱子，50 cm/h 保持1~2 h，能去除结合强的杂质，同时也能去除热源。
（3）清洗后需要重新螯合金属离子。螯合方法：用2~5个柱体积的蒸馏水充分平衡脱镍后的柱子，用0.1~0.3M金属盐溶液过柱5~10个柱体积以螯合金属离子，之后用5~10个柱体积的蒸馏水淋洗以去除未螯合的金属离子。
②在位清洗
（1）去除因离子交换作用吸附的蛋白：2~3个柱体积的2M NaCl溶液反向清洗。
（2）去除强疏水性蛋白和脂质等：4个柱体积的70%乙醇或者30%异丙醇反向清洗。
（3）除去蛋白沉淀、疏水性蛋白：参照凝胶再生步骤。
6、注意事项：
1)使用时保证柱子和缓冲液的温度一致，避免柱床内产生气泡，影响纯化效果。
2)本产品保存条件为20%乙醇，4~8℃。
3)2-25℃,常压,避光运输。
4）仅供科研实验使用。
生命科学事业部业务范围：生物层析纯化介质（琼脂糖、葡聚糖、树脂基）、层析预装柱；纯化介质的选择、定制与使用指导；纯化工艺的开发、优化与定制服务。
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标准化核心产品
蓝晓科技生命科学事业部拥有完整的琼脂糖凝胶介质、葡聚糖凝胶介质、聚甲基丙烯酸介质生产线，年产分离介质近万升，产品质量达到国际领先水平。广泛用于抗体、疫苗、重组蛋白、质粒等分离纯化，可以满足生物医药下游纯化从捕获、中度纯化到精纯各个阶段的使用要求。
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产品品质控制
公司拥有美国PE的ICP光谱仪、安捷伦HPLC、贝克曼13320粒度仪、普朗DNM-9602酶标仪等各种进口检测设备。严格按照医药行业管理规范建立测试方法，从原料检测到生产过程中间控制再到成品检测，所有过程严格按照医药行业标准执行，保证产品用于医药行业的安全性和可靠性。
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蓝晓生命科学事业部建立了 应用实验室和完备的产品及应用评价体系。拥有多台 层析系统以及膜过滤系统、高速冷冻离心机、以及各种型号层析柱等设备，可同时进行各种层析填料的分离性能对比评价。
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稳定的生产控制
蓝晓科技拥有自主研发的国际先进水平的自动化控制系统，可随时监控生产运行情况，生产过程数据或历史曲线可随时显示和查询，保证从配料到反应控制再到成品出料整个生产过程都在程序的 控制中进行。生产全过程的稳定、规范从根本上保证了产品品质的重现性和稳定可靠。
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