生物素化的Oligo(dT)
生物素化的Oligo(dT)本产品是生物素标记的Oligo(dT),其可与大部分真核生物 mRNA 中携带的ploy(A) 形成共价杂交偶联实现的,通过生物素和链霉亲和素的亲和作用,实现mRNA的直接分离,也可用于从总 RNA 中进行第二轮纯化mRNA。
常温运输及保存、有效期一年。
生物素化的Oligo(dT)产品及特点
由于血液富含RNase,因此血液RNA非常容易降解,是临床分子生物学研究中的一个棘手的问题。为解决此问题,本公司在非冻型组织RNA保存液的基础上,开发了本产品,它具有下列特点:
1. 能快速渗透到新鲜血液细胞内,抑制RNA分子的降解。保存的血液RNA常温可放置3天,4℃可放置5天,-20℃可放置3个月。
2. 操作简单,直接将本产品和新鲜血液细胞沉淀按比例混合即可。
3. 适用于人新鲜血和哺乳动物新鲜血液,不适用于陈旧血液和冻凝血液,也不适用于禽类血液和其他动物血液。
4. 重复性好,效果跟进口同类产品相当。
5. 保存的样品可直接用本公司血液RNAout提取RNA。
生物素化的Oligo(dT)使用及效果
将本产品与新鲜血液样品按4:1的比例(4份本产品加1份新鲜血液)混合后即可放置。放置结束后将样品转移到离心管中,5000 g室温离心1分钟,小心吸出浅粉红色的上清液,棕红色沉淀(血细胞和蛋白沉淀)直接用于后续的总RNA提取。
1. 新鲜细胞:如果试剂没有问题,且外源性污染也可以排除,那么降解几乎都来自裂解液的用量不足。如果将裂解液直接加入培养皿中裂解细胞,一定要使裂解液能覆盖住细胞。
2. 新鲜组织:某些富含内源核酸酶的样品(如肝脏,胸腺等),即使使用电动匀浆器匀浆也不能避免RNA的降解。生物素化的Oligo(dT)更可靠的方法是:在液氮条件下将组织研碎,并且匀浆时使用更多裂解液。
3. 冷冻样品:样品取材后应立即置于液氮中速冻,然后移至-70℃冰箱保存。样品决不能未经液氮速冻而直接保存于-70℃冰箱中。冷冻样品,即使是冷冻细胞,如果不在液氮条件下研磨碎,而直接加入裂解液中匀浆,RNA也比新鲜样品更容易降解。样品在与裂解液充分接触前决不能出现融化,所以研磨用具必须预冷,在碾磨过程中要及时补充液氮。样品研碎后,在液氮刚刚挥发完时,将样品迅速转移到含裂解液的容器中,立即混匀匀浆。
4. 外源RNA酶的污染:试剂,器械及实验环境中的RNA酶进入实验系统,可考虑华越洋产品:外源RNA酶清除剂(RNase remover)解决。
5. 内源RNA酶的污染:抑制剂失效或者用量不够,实验样品过多;匀浆时温度过高。
生物素化的Oligo(dT)RNA提取得率低
1. 该组织或者细胞中RNA含量偏低:不同细胞和组织中RNA的丰度不同,如肝脏,胰腺,心脏等是高丰度组织(总RNA含量2-4μg/mg),脑,胚胎,肾脏,肺,胸腺,卵巢等是中丰度组织(总RNA含量0.05-2μg/mg),膀胱,骨,脂肪等是低丰度组织(总RNA含量<0.05μg/mg)。
2. 组织起始量太少或者太多:样品量过少,则细胞组织中RNA含量较低;样品量过多则可能超过裂解液的裂解能力,裂解将不完全,从而导致RNA得率低。
XY130901酵母生产及产孢培养基100mLXY130902酵母产孢培养基100mLXY120517零诱导培养基100mLXY120688放线菌酮溶液1mLXY120680D溶液1mLXY120681可溶性两性霉素B溶液1mLXY60206氨苄青霉素溶液10mLXY60101氨苄青霉素干粉1gXY120682杆菌肽溶液1mLXY120704博莱霉素溶液1mLXY120683羧苄青霉素钠溶液1mLXY120684噻孢霉素溶液1mLXY120685先锋霉素溶液1mLXY60102氯霉素干粉1gXY60207氯霉素溶液10mLXY120687环孢霉素A溶液1mLXY120686细胞松弛素B溶液0.1mLXY131234地塞米松溶液1mLXY120690红霉素溶液10mLXY100838遗传霉素(G418)干粉100mgXY100839潮霉素B干粉250mgXY120692硫酸庆大霉素溶液2mLXY60208硫酸卡那霉素溶液10mLXY60302硫酸卡那霉素干粉1g
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