大提柱式血液DNAOUT
大提柱式血液DNAOUT产品及特点
本产品是基于离心柱/硅胶膜DNA吸附原理的、专门用于从新鲜或冷冻的动物(包括人和禽类)抗凝全血中提取基因组DNA的大提试剂,它是柱式血液DNAout(CAT#:60306-50)的大提升级版,具有下列特点:
1. 处理量更大,一次可以处理5-50 mL血液(对哺乳动物血液)。
2. 吸附量大,一个离心吸附柱最多可以吸附800 μg的DNA。
3. DNA纯净,OD260/280在1.8-2.0之间。不含蛋白质和RNA污染,可直接用于PCR、酶切、Southern杂交等实验。
4. 产量高,一般为200-600 μg/10 mL全血(对哺乳动物血液而言)。
5. 操作简单,整个过程约20分钟,全室温操作,适合大规模样品处理。
6. 安全无毒,本试剂盒不使用苯酚和氯仿,对人体无毒,无腐蚀性和刺激性气味。
7. 本产品也可用于禽类血液等非哺乳动物血液,但各成分用量需要适当优化。
使用及效果
将5-25 mL抗凝血液与等量的红细胞裂解液在自备的10-50 mL的塑料离心管中轻柔混匀,离心5分钟,小心吸弃上清后将细胞沉淀重悬5-25 mL于A型红细胞裂解液中,轻柔混匀,离心5分钟获取白细胞沉淀,加入5 mL溶液A,充分吹打混匀后转移到大提离心吸附柱中,离心2分钟,用25 mL通用洗柱液洗涤吸附柱两次,短暂离心甩干,最后加0.2-1 mL DNA洗脱液洗脱DNA待用。
大提柱式血液DNAOUT产品及特点
由于血液富含RNase,因此血液RNA非常容易降解,是临床分子生物学研究中的一个棘手的问题。为解决此问题,本公司在非冻型组织RNA保存液的基础上,开发了本产品,它具有下列特点:
1. 能快速渗透到新鲜血液细胞内,抑制RNA分子的降解。保存的血液RNA常温可放置3天,4℃可放置5天,-20℃可放置3个月。
2. 操作简单,直接将本产品和新鲜血液细胞沉淀按比例混合即可。
3. 适用于人新鲜血和哺乳动物新鲜血液,不适用于陈旧血液和冻凝血液,也不适用于禽类血液和其他动物血液。
4. 重复性好,效果跟进口同类产品相当。
5. 保存的样品可直接用本公司血液RNAout提取RNA。
大提柱式血液DNAOUT使用及效果
将本产品与新鲜血液样品按4:1的比例(4份本产品加1份新鲜血液)混合后即可放置。放置结束后将样品转移到离心管中,5000 g室温离心1分钟,小心吸出浅粉红色的上清液,棕红色沉淀(血细胞和蛋白沉淀)直接用于后续的总RNA提取。
1. 新鲜细胞:如果试剂没有问题,且外源性污染也可以排除,那么降解几乎都来自裂解液的用量不足。如果将裂解液直接加入培养皿中裂解细胞,一定要使裂解液能覆盖住细胞。
2. 新鲜组织:某些富含内源核酸酶的样品(如肝脏,胸腺等),即使使用电动匀浆器匀浆也不能避免RNA的降解。大提柱式血液DNAOUT更可靠的方法是:在液氮条件下将组织研碎,并且匀浆时使用更多裂解液。
3. 冷冻样品:样品取材后应立即置于液氮中速冻,然后移至-70℃冰箱保存。样品决不能未经液氮速冻而直接保存于-70℃冰箱中。冷冻样品,即使是冷冻细胞,如果不在液氮条件下研磨碎,而直接加入裂解液中匀浆,RNA也比新鲜样品更容易降解。样品在与裂解液充分接触前决不能出现融化,所以研磨用具必须预冷,在碾磨过程中要及时补充液氮。样品研碎后,在液氮刚刚挥发完时,将样品迅速转移到含裂解液的容器中,立即混匀匀浆。
4. 外源RNA酶的污染:试剂,器械及实验环境中的RNA酶进入实验系统,可考虑华越洋产品:外源RNA酶清除剂(RNase remover)解决。
5. 内源RNA酶的污染:抑制剂失效或者用量不够,实验样品过多;匀浆时温度过高。
大提柱式血液DNAOUTRNA提取得率低
1. 该组织或者细胞中RNA含量偏低:不同细胞和组织中RNA的丰度不同,如肝脏,胰腺,心脏等是高丰度组织(总RNA含量2-4μg/mg),脑,胚胎,肾脏,肺,胸腺,卵巢等是中丰度组织(总RNA含量0.05-2μg/mg),膀胱,骨,脂肪等是低丰度组织(总RNA含量<0.05μg/mg)。
2. 组织起始量太少或者太多:样品量过少,则细胞组织中RNA含量较低;样品量过多则可能超过裂解液的裂解能力,裂解将不完全,从而导致RNA得率低。
XY131112氯萘酚溶液50mLXY131114ABTS 溶液50mlXY131115OPD 干粉25gXY131116pNPP 干粉1gXY131108ONPG 干粉1gXY101122尼龙膜1张XY101123PVDF膜1张XY81206氨基黑染膜液250mLXY100924丽春红S染膜液250mLXY100928湿法电转液(干粉)20LXY81207半干法电转液(干粉)20LXY100878Western印迹膜封膜液100mLXY81208印迹膜抗体稀释液100mLXY80813Western印迹膜抗体清除剂50mL|200mLXY1008315-溴-4-氯-3-吲哚磷酸100mgXY100832四氮唑蓝250mgXY81224BCIP/NBT显色试剂盒100mLXY100214预混型BCIP/NBT溶液100mLXY81223增强型DAB显色试剂盒100mLXY101106沉淀型TMB显色试剂盒100mLXY91101一管式 TMB 显色液100mL(A)XY120201超敏化学发光(HRP)检测试剂盒25mL|250mLXY131192超敏化学发光(AP)检测试剂盒25mL
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