大提无内毒素质粒DNAOUT
大提无内毒素质粒DNAOUT产品及特点
本产品是整合经典法大提质粒DNAOUT(CAT#:80912)和菌体内毒素清除剂(CAT#:90901)两个产品而成。用本产品提取的质粒DNA,内毒素的污染浓度低,适合于转染等对内毒素的污染敏感的实验。此产品的特点是:
1. 独创的先去除菌体的内毒素再提质粒DNA策略,彻底避免了内毒素对DNA的污染。
2. 去内毒素效果好,处理一次可以去除99%以上的内毒素。
3. 使用灵活,质粒大量提取和内毒素清除两个产品操作相互可以单独使用。
4. 处理量大,一次可从50-100 mL过夜培养的菌液纯化得到高达300-500 μ g的高拷贝质粒DNA(低拷贝质粒则产率降低)。
5. 得到的质粒DNA可以直接用于转染等实验。
使用及效果
按菌体内毒素清除剂使用手册处理细菌(详见菌体内毒素清除剂使用手册),再用去除内毒素后的细菌提取质粒DNA(详见经典法大提质粒DNAOUT使用手册)。
大提无内毒素质粒DNAOUT产品及特点
由于血液富含RNase,因此血液RNA非常容易降解,是临床分子生物学研究中的一个棘手的问题。为解决此问题,本公司在非冻型组织RNA保存液的基础上,开发了本产品,它具有下列特点:
1. 能快速渗透到新鲜血液细胞内,抑制RNA分子的降解。保存的血液RNA常温可放置3天,4℃可放置5天,-20℃可放置3个月。
2. 操作简单,直接将本产品和新鲜血液细胞沉淀按比例混合即可。
3. 适用于人新鲜血和哺乳动物新鲜血液,不适用于陈旧血液和冻凝血液,也不适用于禽类血液和其他动物血液。
4. 重复性好,效果跟进口同类产品相当。
5. 保存的样品可直接用本公司血液RNAout提取RNA。
大提无内毒素质粒DNAOUT使用及效果
将本产品与新鲜血液样品按4:1的比例(4份本产品加1份新鲜血液)混合后即可放置。放置结束后将样品转移到离心管中,5000 g室温离心1分钟,小心吸出浅粉红色的上清液,棕红色沉淀(血细胞和蛋白沉淀)直接用于后续的总RNA提取。
1. 新鲜细胞:如果试剂没有问题,且外源性污染也可以排除,那么降解几乎都来自裂解液的用量不足。如果将裂解液直接加入培养皿中裂解细胞,一定要使裂解液能覆盖住细胞。
2. 新鲜组织:某些富含内源核酸酶的样品(如肝脏,胸腺等),即使使用电动匀浆器匀浆也不能避免RNA的降解。大提无内毒素质粒DNAOUT更可靠的方法是:在液氮条件下将组织研碎,并且匀浆时使用更多裂解液。
3. 冷冻样品:样品取材后应立即置于液氮中速冻,然后移至-70℃冰箱保存。样品决不能未经液氮速冻而直接保存于-70℃冰箱中。冷冻样品,即使是冷冻细胞,如果不在液氮条件下研磨碎,而直接加入裂解液中匀浆,RNA也比新鲜样品更容易降解。样品在与裂解液充分接触前决不能出现融化,所以研磨用具必须预冷,在碾磨过程中要及时补充液氮。样品研碎后,在液氮刚刚挥发完时,将样品迅速转移到含裂解液的容器中,立即混匀匀浆。
4. 外源RNA酶的污染:试剂,器械及实验环境中的RNA酶进入实验系统,可考虑华越洋产品:外源RNA酶清除剂(RNase remover)解决。
5. 内源RNA酶的污染:抑制剂失效或者用量不够,实验样品过多;匀浆时温度过高。
大提无内毒素质粒DNAOUTRNA提取得率低
1. 该组织或者细胞中RNA含量偏低:不同细胞和组织中RNA的丰度不同,如肝脏,胰腺,心脏等是高丰度组织(总RNA含量2-4μg/mg),脑,胚胎,肾脏,肺,胸腺,卵巢等是中丰度组织(总RNA含量0.05-2μg/mg),膀胱,骨,脂肪等是低丰度组织(总RNA含量<0.05μg/mg)。
2. 组织起始量太少或者太多:样品量过少,则细胞组织中RNA含量较低;样品量过多则可能超过裂解液的裂解能力,裂解将不完全,从而导致RNA得率低。
XY1301 中量/大量细菌基因组DNA提取试剂盒 20次/50次
XY4101 真菌基因组DNA快速提取试剂盒 50次/100次/200次
XY1401 植物基因组DNA快速提取试剂盒 50次/100次/200次
XY1404 大量植物基因组DNA快速提取试剂盒 10次
XY1501 新型植物基因组DNA快速提取试剂盒 50次/100次/200次
XY3801 新型大量植物DNA快速提取试剂盒 10次
XY2001 酵母基因组DNA快速提取试剂盒(离心柱型) 50次
XY2801 酵母基因组DNA提取试剂盒(溶液型) 50次/100次
XY2901 中量/大量酵母基因组DNA提取试剂盒(溶液型) 10次
XY1601 凋亡DNA Ladder快速提取试剂盒 20次/50次
XY1701 选择性凋亡DNA Ladder抽提试剂盒 25次/50次
XY1801 凋亡小体/hoeschst染色试剂盒 100次
XY1901 Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒 25次/50次
XY3901 唾液DNA收集保存运输提取试剂盒 2ml×10次/2ml×50次
XY2101 M13噬菌体单链基因组DNA快速提取试剂盒 50次/100次
XY2201 λ噬菌体基因组DNA快速提取试剂盒 50次/100次
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