硅胶膜DNA离心吸附柱
硅胶膜DNA离心吸附柱产品及特点
硅胶膜离心吸附柱目前广泛用于基因组DNA提取、总RNA提取、DNA反应纯化、DNA胶回收和质粒DNA制备等分子生物学实验,但是由于硅胶膜吸附核酸的能力千差万别(详细分析见综述Silica-DNA结合原理及影响因素),使得市场上相关产品的质量也良莠不齐。经过精心研究,找到特殊的化学修饰方法,使普通硅胶膜吸附核酸的能力增加3-12倍,优于市场上绝大多数产品。本产品就是基于化学修饰硅胶膜的高载量离心吸附柱。
1. 高载量,在同等上样条件下吸附能力比同类产品高1-2倍左右。
2. 与50 mL离心管兼容。
3. 与各种常用的,基于Silica-DNA结合原理的上柱液和洗柱液兼容。
4. 可以再生使用(需要的离心吸附柱再生液)。
5. 结合DNA的性能不会随放置的时间变化。
硅胶膜DNA离心吸附柱产品及特点
由于血液富含RNase,因此血液RNA非常容易降解,是临床分子生物学研究中的一个棘手的问题。为解决此问题,本公司在非冻型组织RNA保存液的基础上,开发了本产品,它具有下列特点:
1. 能快速渗透到新鲜血液细胞内,抑制RNA分子的降解。保存的血液RNA常温可放置3天,4℃可放置5天,-20℃可放置3个月。
2. 操作简单,直接将本产品和新鲜血液细胞沉淀按比例混合即可。
3. 适用于人新鲜血和哺乳动物新鲜血液,不适用于陈旧血液和冻凝血液,也不适用于禽类血液和其他动物血液。
4. 重复性好,效果跟进口同类产品相当。
5. 保存的样品可直接用本公司血液RNAout提取RNA。
硅胶膜DNA离心吸附柱使用及效果
将本产品与新鲜血液样品按4:1的比例(4份本产品加1份新鲜血液)混合后即可放置。放置结束后将样品转移到离心管中,5000 g室温离心1分钟,小心吸出浅粉红色的上清液,棕红色沉淀(血细胞和蛋白沉淀)直接用于后续的总RNA提取。
1. 新鲜细胞:如果试剂没有问题,且外源性污染也可以排除,那么降解几乎都来自裂解液的用量不足。如果将裂解液直接加入培养皿中裂解细胞,一定要使裂解液能覆盖住细胞。
2. 新鲜组织:某些富含内源核酸酶的样品(如肝脏,胸腺等),即使使用电动匀浆器匀浆也不能避免RNA的降解。硅胶膜DNA离心吸附柱更可靠的方法是:在液氮条件下将组织研碎,并且匀浆时使用更多裂解液。
3. 冷冻样品:样品取材后应立即置于液氮中速冻,然后移至-70℃冰箱保存。样品决不能未经液氮速冻而直接保存于-70℃冰箱中。冷冻样品,即使是冷冻细胞,如果不在液氮条件下研磨碎,而直接加入裂解液中匀浆,RNA也比新鲜样品更容易降解。样品在与裂解液充分接触前决不能出现融化,所以研磨用具必须预冷,在碾磨过程中要及时补充液氮。样品研碎后,在液氮刚刚挥发完时,将样品迅速转移到含裂解液的容器中,立即混匀匀浆。
4. 外源RNA酶的污染:试剂,器械及实验环境中的RNA酶进入实验系统,可考虑华越洋产品:外源RNA酶清除剂(RNase remover)解决。
5. 内源RNA酶的污染:抑制剂失效或者用量不够,实验样品过多;匀浆时温度过高。
硅胶膜DNA离心吸附柱RNA提取得率低
1. 该组织或者细胞中RNA含量偏低:不同细胞和组织中RNA的丰度不同,如肝脏,胰腺,心脏等是高丰度组织(总RNA含量2-4μg/mg),脑,胚胎,肾脏,肺,胸腺,卵巢等是中丰度组织(总RNA含量0.05-2μg/mg),膀胱,骨,脂肪等是低丰度组织(总RNA含量<0.05μg/mg)。
2. 组织起始量太少或者太多:样品量过少,则细胞组织中RNA含量较低;样品量过多则可能超过裂解液的裂解能力,裂解将不完全,从而导致RNA得率低。
XY70604miRNA PAGE胶回收试剂盒40次XY80203柱式miRNA PAGE胶回收试剂盒50次XY81105琼脂糖100gXY130835低熔点琼脂糖2.5g|5gXY100864丙烯酰胺溶液(干粉型)200mLXY100877甲叉双丙烯酰胺25gXY100880四甲基乙二胺1.5mLXY100879过硫酸铵0.1g×10XY100873尿素100gXY100933MOPS(电泳级)100gXY80935剥离硅烷50mLXY90308亲和硅烷25mLXY90503电泳级甘油100mLXY100934电泳级二甲苯蓝FF溶液10mLXY100882电泳级溴酚蓝溶液10mLXY100948电泳级橙黄G溶液10mLXY130965PAGE胶长加样枪头1盒XY130966水饱和正丁醇10mLXY130967预混型丙烯酰胺-甲叉双丙烯干粉(19:1)100gXY130968预混型丙烯酰胺-甲叉双丙烯干粉(29:1)100g
核酸扩增(PCR)
XY100844PCR优化试剂盒1套XY90302氯化锰溶液,PCR级5mLXY70905明胶溶液,2%,PCR级1.5mLXY61203高GC DNA清除剂,PCR级1.5mLXY130307二氯化锰溶液,25mM,PCR级5mLXY130840硫酸镁溶液,10mM,PCR级5mLXY130841石蜡油,PCR级10mLXY80205DMSO,PCR级1.5mLXY130506海藻糖溶液,1.5M,PCR级1.5mLXY70902甜菜碱溶液,5M,PCR级1.5mL
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