天净沙Ribo-SPIA cDNA 扩增试剂盒
天净沙Ribo-SPIA cDNA 扩增试剂盒产品及特点
血液样品和各种临床样品(包括组织检查、FFPE 切片或少量细胞样品)都是基因表达分析和诊断的常见材料,但这些样品通常数量有限,质量不高,并且还没法进行第二次取样。所以得到足够RNA 量供后续试验是一个非常棘手的瓶颈。为解决这一问题,本公司根据Ribo-SPIA 技术,开发了本产品。Ribo-SPIA 技术的核心是利用DNA/RNA 嵌合引物进行逆转录并得到双链cDNA、RNase H 不间断地在cDNA 第1 链中的RNA 部分产生裂口,DNA 聚合酶以此裂口为基础进行链取代聚合反应,产生cDNA 单链。此技术原理图如下:
本产品具有下列特点:
1. 高效,能线性扩增1500-2000 倍,能用5-50 ng 总RNA 模板扩增得到mg 级的高纯度cDNA。
2. 步骤简单方便,扩增在恒温进行,只需要4 个小时,不需要特殊仪器设备。
3. 保真性好,保持RNA 样品中各分子的相对丰度。
4. 尤其适用于RNA 产量和质量都不高的样品。
5. 扩增得到的cDNA 能直接用于各种后续试验,包括qPCR、芯片分析、杂交反应等。
使用及效果
详细使用步骤请参见使用手册
天净沙Ribo-SPIA cDNA 扩增试剂盒产品及特点
由于血液富含RNase,因此血液RNA非常容易降解,是临床分子生物学研究中的一个棘手的问题。为解决此问题,本公司在非冻型组织RNA保存液的基础上,开发了本产品,它具有下列特点:
1. 能快速渗透到新鲜血液细胞内,抑制RNA分子的降解。保存的血液RNA常温可放置3天,4℃可放置5天,-20℃可放置3个月。
2. 操作简单,直接将本产品和新鲜血液细胞沉淀按比例混合即可。
3. 适用于人新鲜血和哺乳动物新鲜血液,不适用于陈旧血液和冻凝血液,也不适用于禽类血液和其他动物血液。
4. 重复性好,效果跟进口同类产品相当。
5. 保存的样品可直接用本公司血液RNAout提取RNA。
天净沙Ribo-SPIA cDNA 扩增试剂盒使用及效果
将本产品与新鲜血液样品按4:1的比例(4份本产品加1份新鲜血液)混合后即可放置。放置结束后将样品转移到离心管中,5000 g室温离心1分钟,小心吸出浅粉红色的上清液,棕红色沉淀(血细胞和蛋白沉淀)直接用于后续的总RNA提取。
1. 新鲜细胞:如果试剂没有问题,且外源性污染也可以排除,那么降解几乎都来自裂解液的用量不足。如果将裂解液直接加入培养皿中裂解细胞,一定要使裂解液能覆盖住细胞。
2. 新鲜组织:某些富含内源核酸酶的样品(如肝脏,胸腺等),即使使用电动匀浆器匀浆也不能避免RNA的降解。天净沙Ribo-SPIA cDNA 扩增试剂盒更可靠的方法是:在液氮条件下将组织研碎,并且匀浆时使用更多裂解液。
3. 冷冻样品:样品取材后应立即置于液氮中速冻,然后移至-70℃冰箱保存。样品决不能未经液氮速冻而直接保存于-70℃冰箱中。冷冻样品,即使是冷冻细胞,如果不在液氮条件下研磨碎,而直接加入裂解液中匀浆,RNA也比新鲜样品更容易降解。样品在与裂解液充分接触前决不能出现融化,所以研磨用具必须预冷,在碾磨过程中要及时补充液氮。样品研碎后,在液氮刚刚挥发完时,将样品迅速转移到含裂解液的容器中,立即混匀匀浆。
4. 外源RNA酶的污染:试剂,器械及实验环境中的RNA酶进入实验系统,可考虑华越洋产品:外源RNA酶清除剂(RNase remover)解决。
5. 内源RNA酶的污染:抑制剂失效或者用量不够,实验样品过多;匀浆时温度过高。
天净沙Ribo-SPIA cDNA 扩增试剂盒RNA提取得率低
1. 该组织或者细胞中RNA含量偏低:不同细胞和组织中RNA的丰度不同,如肝脏,胰腺,心脏等是高丰度组织(总RNA含量2-4μg/mg),脑,胚胎,肾脏,肺,胸腺,卵巢等是中丰度组织(总RNA含量0.05-2μg/mg),膀胱,骨,脂肪等是低丰度组织(总RNA含量<0.05μg/mg)。
2. 组织起始量太少或者太多:样品量过少,则细胞组织中RNA含量较低;样品量过多则可能超过裂解液的裂解能力,裂解将不完全,从而导致RNA得率低。
XY90802 大提柱式DNA清除剂 5次
XY90903 无RNase的DNase溶液 300U
XY90904 膜结合DNA清除试剂盒 50次
XY60204 非酶多糖清除剂(RNA专用) 10mL
XY100802 重蒸酚 100mL
XY3190 水饱和酚 100mL
XY3191 Tris饱和酚 100mL
XY100803 酸酚 100mL
XY100804 氯仿-异戊醇混合液 100mL
XY100805 酚-氯仿-异戊醇混合液 100mL
XY100935 超纯水 100mL
XY60604 DEPC水 100mL
XY80403 RNase-free水 10mL
XY71207 RNA洗脱液 50mL
蛋白质研究
XY80807动物细胞裂解液50mL(A)|50mL(B)XY131006RIPA裂解液(强)100mLXY131007RIPA裂解液(中)100mLXY131008RIPA裂解液(弱)100mLXY131009NP-40裂解液100mLXY90707动植物总蛋白微量提取试剂盒50次XY91204动植物膜蛋白微量制备试剂盒50次XY90613动物细胞核蛋白微量制备试剂盒25次|100次
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