考马斯亮蓝R-250染液产品及特点

考马斯亮蓝R250是最经典的SDS-PAGE染色方法，本产品就是基于此方法而开发的产品。它具有下列特点：

1. 即开即用，不需要自己单独准备所有溶液。

2. 不需昂贵仪器，肉眼即可观察结果，不象其他纳克级的染色方法需要贵重的仪器设备（如SYPRO系列的高灵敏度的荧光染料需要荧光成像系统）。

3. 与普通扫描仪等兼容，便于保存数据和后续处理。

4. 考马斯亮蓝R250尤其适用于SDS-PAGE电泳微量蛋白质的染色。

使用及效果

凝胶电泳停止后，切除浓缩胶， 转移分离胶至染色容器中。倒入30-40 mL染色液，摇床染色3-4小时。弃掉染色液，加入脱色液脱色。重复脱色2-3次，直至背景透明，条带更清楚。常规扫描或保存。染色液可重复使用2-3次。

备忘录

考马斯亮蓝R250与G250的区别考马斯亮蓝R250（Coomassie brilliant blue R250）。C45H44O7H3S2Na，MW=824，λmax=560―590nm。染色灵敏度比氨基黑高5倍。尤其适用于SDS电泳微量蛋白质染色。但蛋白质浓度超出一定范围时，对高浓度蛋白的染色不符合Beer定律，用作定量分析时要注意这点。

考马斯亮蓝G250，又名Xylene brilliant cyaninG。比考马斯亮蓝R250多二个甲基。MW=854；λmax=590―610nm。优点在于它在三氯乙酸中不溶而成胶体，能选择地染色蛋白而几乎无本底色。所以常用于需要重复性好和稳定的染色，适于作定量分析。

G250和R250在冷水中分别为微溶和不溶，在热水和乙醇中分别为可溶和微溶。两种染料均能对固定的蛋白有效地进行染色。

考马斯亮蓝R-250染液细菌的培养和收集：

将含有质粒pBS的DH5α菌种接种在LB固体培养基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培养12-24小时。用无菌牙签挑取单菌落接种到5ml LB液体培养基(含50μg/ml Amp)中,37℃振荡培养约12小时至对数生长后期。

考马斯亮蓝R-250染液质粒DNA少量快速提取：

质粒DNA小量提取法对于从大量转化子中制备少量部分纯化的质粒DNA十分有用。这些方法共同特点是简便、快速，能同时处理大量试样,所得DNA有一定纯度,可满足限制酶切割、电泳分析的需要。

　考马斯亮蓝R-250染液（一）、煮沸法

　　1、将1.5ml培养液倒入eppendorf管中,4℃下12000ｇ离心30秒。

　　2、弃上清，将管倒置于卫生纸上几分钟，使液体流尽。

　　3、将菌体沉淀悬浮于120ml STET溶液中, 涡旋混匀。

　　4、加入10ml新配制的溶菌酶溶液(10mg/ml), 涡旋振荡3秒钟。

　　5、将eppendorf管放入沸水浴中,50秒后立即取出。

　　6、用微量离心机4℃下12000g离心10分钟。

　　7、用无菌牙签从eppendorf管中去除细菌碎片。

　　8、取20ml进行电泳检查。

XY130901酵母生产及产孢培养基100mLXY130902酵母产孢培养基100mLXY120517零诱导培养基100mLXY120688放线菌酮溶液1mLXY120680D溶液1mLXY120681可溶性两性霉素B溶液1mLXY60206氨苄青霉素溶液10mLXY60101氨苄青霉素干粉1gXY120682杆菌肽溶液1mLXY120704博莱霉素溶液1mLXY120683羧苄青霉素钠溶液1mLXY120684噻孢霉素溶液1mLXY120685先锋霉素溶液1mLXY60102氯霉素干粉1gXY60207氯霉素溶液10mLXY120687环孢霉素A溶液1mLXY120686细胞松弛素B溶液0.1mLXY131234地塞米松溶液1mLXY120690红霉素溶液10mLXY100838遗传霉素(G418)干粉100mgXY100839潮霉素B干粉250mgXY120692硫酸庆大霉素溶液2mLXY60208硫酸卡那霉素溶液10mLXY60302硫酸卡那霉素干粉1g