正苯基萘胺摄入法细菌膜损伤荧光检测试剂盒产品说明书（中文版）

主要用途

正苯基萘胺摄入法细菌膜损伤荧光检测试剂是一种旨在通过使用疏水荧光染料正苯基萘胺，与膜磷脂成分结合，产生强烈蓝色荧光，作为检测信号来测定细菌细胞膜损伤程度的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心改良、成功实验证明的。适用于革兰氏阴性和阳性细菌的膜完整性检测。产品严格无菌，即到即用，性能稳定，荧光清晰。

技术背景

正苯基萘胺（1-N-phenyl-naphtylamine；NPN）是一种疏水性（hydrophobic）荧光探针，在磷脂环境下，而不是在水相环境下，产生强烈蓝色荧光。完整的细菌细胞外膜对正苯基萘胺发生排斥，一旦膜遭到损害，正苯基萘胺可以进入膜磷脂层，而显示荧光增强现象，其产生的蓝色荧光基团的吸收峰是355nm，而散射峰是460nm，成为一种常用的荧光检测信号，以此来评价细菌膜损伤程度。  

产品内容

HENDAIL缓冲液（Reagent A）       毫升

HENDAIL染色液（Reagent B）     微升

产品说明书                         1份

保存方式

保存在－20℃冰箱里，HENDAIL染色液（Reagent B）避免光照，有效保证6月

用户自备

微型台式离心机：用于细菌沉淀收集

1.5毫升离心管：用于样品处理的容器

比色皿或96孔板：用于样品荧光检测的容器

荧光分光光度仪或荧光酶标仪：用于细菌染色后分析

实验步骤

实验开始前，开启荧光分光光度仪预热，设定激发波长355nm，散发波长460nm。然后进行下列操作：

• 移取1毫升细菌培养瓶里的新鲜菌液（OD₆₀₀＝0.50）到新的1.5毫升离心管
• 放进微型台式离心机离心1分钟，速度为16000g （或13000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽去上清液
• 加入xx毫升HENDAIL缓冲液（Reagent A），充分混匀
• 放进微型台式离心机离心1分钟，速度为16000g （或13000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽去上清液
• 重复实验步骤4至6一次
• 加入xx毫升HENDAIL缓冲液（Reagent A），充分混匀
• 小心移取150微升菌液到比色皿或96孔板的样品孔里
• 加入45微升用户自备的药物
• 加入xx微升HENDAIL染色液（Reagent B），混匀
• 置于25℃温度下孵育5分钟
• 即刻放进荧光分光光度仪或荧光酶标仪：激发波长355nm，散发波长460nm
• 获得相对荧光单位（Relative Fluorescence Unit）
• 构建损伤曲线：纵座标（Y轴）为相对荧光单位；横座标（X轴）为药物浓度
• 或比较不同细菌的膜损伤程度

注意事项

• 本产品为20次操作
• 操作时，须戴手套
• 样品须使用HENDAIL缓冲液（Reagent A）清理处理
• 用户自备的药物，避免使用盐类溶液配制
• 通常样品染色后2至5分钟趋于饱和  
• 建议细菌染色后即刻进行荧光分析
• 本公司提供系列细菌分析试剂产品

质量标准

• 本产品经鉴定性能稳定
• 本产品经鉴定荧光清晰