植物游离氨基酸含量比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）

主要用途

YIJI植物游离氨基酸含量比色法定量检测试剂是一种旨在通过显色染料茚三酮与游离氨基酸的氨基发生反应，在热处理下，产生蓝色复合物，由分光光度仪比色分析，定量检测样品中游离氨基酸含量的权威而经典的技术方法。该技术经过精心设计、成功实验证明的。适用于各种植物组织，包括种子（seed）、叶片（leaf）、根（root）等裂解悬液样品的游离氨基酸含量检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，检测准确。

技术背景

氨基酸（amino acid或α-amino acid）是一种含有胺和羧基功能基团的分子，为生物体中最必须的元素。根据其侧链的不同，分成四类（弱酸、弱碱、极性、非极性）和20种各种不同的氨基酸；根据其光学异构体（optical isomers），又分成L型和D型。L-氨基酸是构成蛋白质的主要结构分子。氨基酸是多肽、蛋白质和辅酶等的组成单位，具有各种代谢作用和营养价值。基于游离氨基酸的游离氨基与茚三酮（ninhydrin）反应，产生中间产物酮酸（keto acid）和氨分子，进而在热处理下，进行脱羧基过程（仅发生于游离氨基酸），同时产生蓝色复合物，在分光光度仪（570nm波长）下，呈现吸光峰值的变化，来定量分析游离氨基酸的总含量。其反应系统如下：

产品内容

YIJI清理液（Reagent A） 毫升

YIJI萃取液（Reagent B）               毫升

YIJI缓冲液（Reagent C） 毫升

YIJI反应液（Reagent D） 毫升

YIJI标准液（Reagent E） 微升

产品说明书               1份

保存方式

保存YIJI萃取液（Reagent B）和YIJI标准液（Reagent E）在－20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里；YIJI反应液（Reagent D）具有挥发性，严格密闭瓶盖，避免光照；有效保证6月

用户自备

1.5毫升离心管：用于标准液配制和样品操作的容器

15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器

干式恒温仪：用于反应孵育

DOUNCE匀浆器：用于裂解组织

微型台式离心机：用于样品操作

比色皿：用于比色分析的容器

分光光度仪：用于比色分析

实验步骤

一、样品准备

• 准备好新鲜的植物组织（叶片、谷粒、种子等），并秤重以确定1克组织重量 
• （选择步骤）放进预冷的15毫升锥形离心管
• （选择步骤）加入xx毫升YIJI清理液（Reagent A）清洗1次
• 即刻用刀片切碎组织
• 放进一个预冷的15毫升锥形离心管
• 加入预冷的xx毫升YIJI萃取液（Reagent B）
• 涡旋震荡5秒，充分混匀
• 即刻放进预冷的DOUNCE匀浆器，在冰槽里用匀浆棒匀化组织（约80下）
• 将所有组织匀浆物移入1.5毫升离心管，放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为5000g（或7500RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心移出上清液（注意：不要触碰沉淀物）到另一个新的预冷的1.5毫升离心管
• （选择步骤）如果上清液含有肉眼可见的残渣，重复离心5分钟一次，速度为5000g（或7500RPM，例如eppendorf 5415）
• 移取10微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用YIJI Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－YJ30030.1）
• 放进－70℃的冰箱里保存或置于冰槽里备用

二、标准样品配制

• 准备好5个1.5毫升离心管，标记为1至5号管
• 分别加入xx微升YIJI缓冲液（Reagent C）到1至5号管
• 移取xx微升YIJI标准液（Reagent E）到1号管，混匀
• 小心移取xx微升1号管稀释的YIJI标准液（Reagent E）到2号管，混匀
• 小心移取xx微升2号管稀释的YIJI标准液（Reagent E）到3号管，混匀
• 小心移取xx微升3号管稀释的YIJI标准液（Reagent E）到4号管，混匀
• 将1至5号管放进冰槽里备用；标准管浓度见下表

• 标准曲线测定

• 加入xx微升YIJI缓冲液（Reagent C）到1.5毫升离心管
• 加入xx微升上述配制的YIJI标准液（Reagent E）
• 加入xx微升YIJI反应液（Reagent D）
• 涡旋震荡15秒
• 放进90℃干式恒温仪孵育5分钟，避免光照
• 放进冰槽里1分钟
• 转移到比色皿
• 即刻放进分光光度仪检测（波长570nm）：获得吸光读数
• 重复实验步骤1至8四次
• 构建标准曲线：纵座标（Y轴）为吸光读数；横座标（X轴）为标准氨基酸浓度（微摩尔/升）

• 样品测定

• 加入xx微升YIJI缓冲液（Reagent C）到1.5毫升离心管
• 加入500微升待测样品
• 加入xx微升YIJI反应液（Reagent D）
• 涡旋震荡15秒
• 放进90℃干式恒温仪孵育5分钟，避免光照
• 放进冰槽里1分钟
• 转移到比色皿
• 即刻放进分光光度仪检测（波长570nm）：获得吸光读数
• 根据标准曲线获得样品对应氨基酸浓度（微摩尔/升）

• 浓度计算

• 根据标准曲线获得样品对应氨基酸浓度（微摩尔/升）X稀释倍数 =（微摩尔/升）

注意事项

• 本产品为25次操作，包括标准样品
• 避免使用Tris 缓冲液、尿素等胺类物质处理样品
• 操作时，须戴手套
• 系统操作时，标准样品测定只需1次
• YIJI反应液（Reagent D）具有挥发性，严格密闭瓶盖，避免光照
• 孵育时，避免光照 
• 本公司提供系列氨基酸检测试剂产品 

质量标准

• 本产品经鉴定性能稳定
• 本产品经鉴定检测敏感

使用承诺

上海一基秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息

单组分订购信息

编号 名称 规格

YJ19193.5 YIJI植物游离氨基酸含量比色法定量检测试剂盒       20次

YJ19193.5A YIJI清理液（Reagent A） 毫升

YJ19193.5B YIJI萃取液（Reagent B） 毫升

YJ19193.5C YIJI缓冲液（Reagent C） 毫升

YJ19193.5D YIJI反应液（Reagent D） 毫升

YJ19193.5E  YIJI标准液（Reagent E） 毫升

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