大鼠肾上腺素能受体β1(ADRβ1)检测试剂盒应用于血清，血浆，组织匀浆和其他生物液体中肾上腺素能受体β1(ADRβ1)的定性或定量检测。

规格：48T / 96T/盒

种属：大鼠

检测范围：0.156-10ng/mL

灵敏度：0.055ng/mL

储存：4℃保存6个月

注意：仅供研究使用。

大鼠肾上腺素能受体β1(ADRβ1)检测试剂盒组份：

大鼠肾上腺素能受体β1(ADRβ1)检测试剂盒测定原理：

该试剂盒基于ELISA检测方法。 该试剂盒中提供的微量滴定板已用肾上腺素能受体β1(ADRβ1)预涂。 在反应过程中，样品或标准品中的肾上腺素能受体β1(ADRβ1)与肾上腺素能受体β1(ADRβ1)特异性生物素化检测抗体上固定相载体上固定量的肾上腺素能受体β1(ADRβ1)竞争。 从板中洗涤过量的缀合物和未结合的样品或标准品，并将HRP-链霉亲和素（SABC）加入每个微孔板并孵育。 然后将TMB底物溶液加入每个孔中。 通过加入硫酸溶液终止酶 - 底物反应，并在450nm的波长下用分光光度法测定颜色变化。 然后通过将样品的O D与标准曲线进行比较来确定样品中肾上腺素能受体β1(ADRβ1)的浓度。

大鼠肾上腺素能受体β1(ADRβ1)检测试剂盒注意事项：

1.为了检查实验操作的有效性和样品稀释比例的适用性，推荐使用标准和少量样品的试验性实验。

2.打开后使用前，保持板材干燥。

3.在使用套件之前，旋转管子并将所有组件放在管底部。

4.存储TMB试剂避免发光。

5.洗衣过程非常重要，不能完全洗净容易造成假阳性。

6.对于标准和样品测试，建议进行重复测定。

7.不要让微量板在测定中干燥，干燥的板会使板上的活性组分失活。

8.不要重复使用尖端和管道，以避免交叉污染。

9.不使用不同批次的试剂。

材料需要但不提供：

1.微板阅读器（波长：450nm）

2.37℃培养箱

3.自动洗板机

4.精密单通道和多通道移液器和一次性吸头

5.清洁管和Eppendorf管

6.去离子水或蒸馏水

手动洗涤：

在不接触侧壁的情况下，将溶液丢弃在板中。 在吸收性滤纸或其他吸收材料上拍打平板。 用350ul洗涤缓冲液完全填充每个孔，并浸泡1至2分钟，然后从板中吸出内容物，并将板拍到吸收性滤纸或其他吸收材料上。 重复此过程两次，共三次洗涤。

自动洗涤：

吸出所有的孔，然后用350ul洗涤缓冲液洗板三次。 最终洗涤后，倒置板，并将板拍在吸收性滤纸或其他吸收材料上。 建议洗衣机设置浸泡1分钟。

大鼠肾上腺素能受体β1(ADRβ1)检测试剂盒样品收集和储存：

收集后立即隔离测试样品，然后立即（2小时内）分析。或等分并储存在-20°C长期。避免多次冻融循环。

1.血清：将全血样品在室温放置2小时或放置在4℃过夜，并以约1000×g离心20分钟，收集上清液，立即进行测定。采血管应为一次性，非致热原和非内毒素。

2.血浆：使用EDTA-Na2作为抗凝剂收集血浆。在收集30分钟内，以2×8℃在1000×g离心样品15分钟。收集上清液并立即进行测定。避免溶血，高胆固醇样本。

3.组织匀浆：溶血血与检测结果有关，有必要用预先冷却的PBS缓冲液（0.01M，pH = 7.4）洗涤组织去除残留血液。称重后将其重新组织并使其在PBS中均化（体积取决于组织的重量）一般来说，9mL PBS适用于1克组织片，推荐使用一些蛋白酶抑制剂加入PBS中）匀浆器在冰上为了进一步破坏细胞，您可以用超声波细胞破坏器超声处理悬浮液，或者进行冻融循环。然后将匀浆物以5000×g离心5分钟以得到上清液。

4.培养上清液：在2-8℃下以1000×g离心上清液20分钟以除去不溶性杂质和细胞碎片。收集清除上清液，立即进行检测。

5.其他生物液体：以2-8℃的1000×g离心样品20分钟。收集上清液并立即进行测定。

6.样品制备：样品应透明透明，并通过离心除去悬浮固体。

注意：5天内使用的样品可以储存在4°C，此外，样品必须储存在-20°C（测定≤1个月）或-80°C（测定≤2个月）以避免损失 生物活性和污染。 溶血样品不适合该测定。

大鼠肾上腺素能受体β1(ADRβ1)检测试剂盒样品稀释指南

最终用户应估计测试样品中靶蛋白的浓度，并选择适当的稀释因子使稀释的靶蛋白浓度降至试剂盒的最佳检测范围。 用提供的稀释缓冲液稀释样品，可能需要进行几次试验。 测试样品必须与稀释缓冲液充分混合。 标准曲线和样品应在实验前进行。 以下稀释液仅供参考：

1.高浓度（10000-100000pg / ml）：稀释：1：100。 （即将1μl样品加入到99μl样品/标准稀释缓冲液中）

2.中浓度（1000-10000pg / ml）：稀释1:10（即将10μl样品加入90μl样品/标准稀释缓冲液中）

3.低浓度（15.625-1000pg / ml）稀释：1：2。 （即将50μl样品加入50μl样品/标准稀释缓冲液中）

4.低浓度（≤15.625pg/ ml）：不必稀释或以1:2稀释。

试剂准备和储存：

将试剂盒置于室温下20分钟后再使用。

1，洗涤缓冲液：

用去离子水或蒸馏水稀释30 mL浓缩洗涤缓冲液至750 mL洗涤缓冲液。将未使用的溶液放回4°C。如果在浓缩物中形成晶体，可以用40°C水浴加热（加热温度不要超过50°C），并轻轻混合，直到晶体完全溶解。溶液在使用前应冷却至室温。

2，标准：

1）1000pg / ml标准溶液：将1ml样品/标准稀释缓冲液加入到一个标准管中，将管保持在室温10分钟并彻底混合。

2）500pg / ml→15.625pg / mlof标准溶液：标记6个具有500pg / ml，依次倒入Eppendorf管。将0.3ml的样品/标准稀释缓冲液等分到每个管中。将0.3ml上述1000pg / ml标准溶液加入第一管中，并彻底混合。将0.3毫升从第一管转移到第二管，并彻底混合。将0.3ml从第二管转移至第三管，并充分混合，等等。

 大鼠肾上腺素能受体β1(ADRβ1)检测试剂盒稀释图：

注意：标准溶液最好在2小时内使用。 标准溶液应在4℃下长达12小时。 或在-20°C储存长达48小时。 避免反复冻融循环。

3.生物素标记抗体工作液的制备

在实验前1小时准备。

1）计算所需工作溶液总体积：0.05ml /孔×孔数。 （允许比总体积多0.1-0.2ml）。

2）用1:100的抗体稀释缓冲液稀释生物素标记的抗体并彻底混合。 （即将1μl生物素标记的抗体加入到99μl抗体稀释缓冲液中）。

4.制备HRP-链霉亲和素偶联物（SABC）工作解：

在实验前30分钟内进行准备。

1）计算所需的工作溶液总体积：0.1ml /孔×井数。 （允许比总体积多0.1-0.2ml）

2）用SABC稀释缓冲液稀释SABC，1：100，充分混匀。 （即加入1μlSABC转化成99μl的SABC稀释缓冲液）

大鼠肾上腺素能受体β1(ADRβ1)检测试剂盒测定程序：

在将试剂加入孔中之前，在37℃下使TMB底物平衡30分钟。 稀释样品和试剂时，必须完全均匀混合。 建议绘制每个测试的标准曲线。

1.分别在预涂板上设置标准，测试样品和对照（零）孔，然后记录其位置。 建议一式两份测量每个标准品和样品。 洗板2次，然后加入标准样品和对照（零）孔！

2.添加样品和生物素标记的抗体：每孔加入50μL标准品，空白样品或样品。 空白孔加入样品/标准稀释缓冲液。 立即向每个孔中加入50μL生物素标记的抗体工作溶液。 盖我们提供的板封口机。 轻轻敲打板，以确保充分混合。 在37°C孵育45分钟。

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