真菌/酵母细胞样品细胞周期碘化丙啶
真菌/酵母细胞样品细胞周期碘化丙啶（PROPIDIUM IODIDE）红色荧光
流式细胞分析试剂盒产品说明书（中文版）
主要用途
YIJI真菌/酵母细胞样品细胞周期碘化丙啶（PROPIDIUM IODIDE）红色荧光流式细胞分析试剂是一种旨在通过细胞流式仪测定真菌/酵母细胞中DNA结合碘化丙啶染料程度，来定量DNA含量，以进一步获取细胞周期分布状况的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种真菌/酵母细胞，包括芽殖酵母、裂殖酵母等的细胞周期分析。可以被用于细胞凋亡、信号传递、细胞分裂、代谢等的研究。产品严格无菌，即到即用，分辨率高，操作简捷，性能稳定。
技术背景
真菌/酵母细胞样品细胞周期碘化丙啶（PROPIDIUM IODIDE）红色荧光
流式细胞分析试剂盒产品说明书（中文版）
芽殖酵母（Saccharomyces cerevisiae）、裂殖酵母（Schizosacchromyces pombe）是研究真核生物细胞周期的模式生物。细胞周期是评价细胞代谢、生理和病理状况的重要指标。通过DNA结合染料，借助细胞流式仪，测定出DNA含量，根据DNA含量随着细胞周期的不同而发生变化，来确定和区别细胞周期的不同阶段。流式细胞术（FLOW CYTOMETRY）是七十年代发展起来的集计算机、激光、流体力学、细胞化学、细胞免疫学为一体的高科学技术。凋亡细胞是在正常G0/G1峰细胞群前出现亚二倍体峰（sub-G1）细胞群。
产品内容
YIJI清理液（Reagent A） 200毫升
YIJI固着液（Reagent B） 100毫升
YIJI抗干扰液（Reagent C） 25毫升
YIJI酶解液（Reagent D） 10毫升
YIJI染色液（Reagent E） 25毫升
产品说明书 1份
保存方法
保存YIJI抗干扰液（Reagent C）、YIJI酶解液（Reagent D）和YIJI染色液（Reagent E）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里；YIJI染色液（Reagent E）避免光照，有效保证6月
用户自备
2毫升离心管：用于细胞染色的容器
（微型）台式离心机：用于样品操作操作
培养箱或恒温水槽：用于反应孵育
细胞流式仪：用于细胞荧光分析
实验步骤
- 准备好5 X 106的待测真菌/酵母细胞
- 放进微型台式离心机离心1分钟，速度为16000g
- 小心抽去上清液
- 加入1毫升YIJI清理液（Reagent A）到2毫升离心管，混匀
- 放进微型台式离心机离心1分钟，速度为16000g
- 小心抽去上清液
- 缓慢加入2毫升预冷的YIJI固着液（Reagent B），且涡旋震荡混匀
- 放进4℃冰箱里孵育16小时
- 放进微型台式离心机离心1分钟，速度为16000g
- 小心抽去固着液
- 加入1毫升YIJI清理液（Reagent A），混匀
- 放进微型台式离心机离心1分钟，速度为16000g
- 小心抽去上清液
- 重复实验步骤11至13一次
- 加入500微升YIJI抗干扰液（Reagent C），混匀
- 放进37℃恒温水槽，孵育2至16小时
- 放进微型台式离心机离心1分钟，速度为16000g
- 小心抽去上清液
- 加入200微升YIJI酶解液（Reagent D），混匀
- 放进37℃恒温水槽，孵育20分钟
- 放进微型台式离心机离心1分钟，速度为16000g
- 小心抽去上清液
- 加入500微升YIJI清理液（Reagent A），混匀
- 放进微型台式离心机离心1分钟，速度为16000g
- 小心抽去上清液
- 加入500微升YIJI染色液（Reagent E），混匀细胞颗粒群
- 超声处理100瓦，30%功率，15秒
- 在暗室里37℃培养箱里孵育30分钟
- 移入到细胞流式仪专用测试管（可放进4℃冰箱里待测）
- 即刻进行细胞流式仪分析：波长488nm氩离子激光出现红色荧光（或488nm激发波长，610nm散发波长），观察50000个细胞以上
注意事项
- 本产品为50次操作
- 操作时，须戴手套
- 孵育时，必须避免光照
- 建议细胞染色完成后，即刻进行细胞流式仪分析。如果放进4℃冰箱里待测，不要超过1周
- 细胞流式仪分析前，须混匀内容物，或超声处理，避免细胞成团
- 细胞检测量不得少于10000个
- 告知流式仪技术员有关细胞类型
- 使用未经染色的细胞进行FSC与SSC设定，然后将染色细胞调整到未经染色细胞的水平，包括FL1、FL2、FL3的PMT
- 建议设定：
Detector FSC E00 Gain：3
Detector FL2-A Voltage：890 Gain：2
流速：500/秒
- 本公司提供系列细胞周期分析试剂产品
质量标准
- 本产品经鉴定性能稳定
- 本产品经鉴定荧光清晰
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