持久型ECL免疫印迹化学发光溶液产品说明书（中文版）

主要用途

持久型ECL免疫印迹化学发光溶液是一种旨在通过鲁米诺和4-碘苯硼酸非放射性（辣根过氧化酶）持久发光系统，检测固定在固相膜上（如NC、PVDF等）的10皮克以上蛋白，经X光片（放射自显影片）感光记录其免疫印迹的实验辅助试剂。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于辣根过氧化酶标记蛋白的免疫学检测。产品即到即用，性能稳定，操作便捷，敏感度高，发光持久，重复性好。

技术背景

蛋白（10pg以上）固定在固相免疫印迹膜上，进行辣根过氧化酶（HRP）标记处理，加入免疫印迹化学发光试剂，在电子传递载体试剂的帮助下，辣根过氧化酶使发光物鲁米诺（Luminol）氧化降解并发光（波长为428nm），用X光片快速获得永久的硬拷贝结果。4-碘苯硼酸（4-Iodophenylboronic acid）具有增强发光效果，5分钟内达到峰值，稳定发光30分钟以上的特点。

产品内容

发光液A（Reagent A） 100毫升

发光液B（Reagent B） 500微升

发光液C（Reagent C） 500微升

产品说明书        1份

保存方式

保存在4℃冰箱里；发光液B（Reagent B），避免光照；有效保证6月

用户自备

固相膜：用于蛋白转移的载体

15毫升锥形离心管：用于发光工作液配制的容器

平式摇荡仪：用于孵育和混匀反应

X光片：用于发光显影

实验步骤

实验开始前，将4℃冰箱里的试剂盒中的试剂置入室温下，移出10毫升发光液A（Reagent A）到15毫升锥形离心管，加入50微升发光液B（Reagent B）和20微升发光液C（Reagent C），混匀后，标记为发光工作液，用锡箔纸包裹，避免光照。然后进行下列操作。

• 准备好含有待测蛋白的固相膜（5 X 8 cm²）：包括电泳、转印、封阻、一抗（或生物素）处理、辣根过氧化酶（HRP）标记的二抗（或链霉亲和素）处理、清洗等步骤
• 加入8至10毫升室温预热的发光工作液，铺满整个固相膜表面
• 置于平式摇荡仪上，在室温下孵育3至5分钟，避免光照
• 用镊子夹起固相膜，一角放在吸水纸上，吸干发光液
• 用保鲜膜塑料纸包住，避免气泡
• 置于X光片夹压片（膜片蛋白吸附面面向X光片），曝光10秒至15分不等

注意事项

• 本产品为100毫升（1000 cm²膜片）
• 建议5毫升用于1张5 X 8 cm²膜片
• 操作时，须戴手套
• 发光工作液配制后1小时内使用，且切莫暴露在光线下，否则影响效果
• 膜片封闭和洗涤处理十分重要
• 孵育时，避免光照
• 曝光时间需根据情况调整
• 膜片印迹可去除后重新探查，建议使用免疫印迹化学发光印迹消除试剂盒－30006.2
• 本公司提供非化学发光：二氨基联苯胺（DAB）显色产品
• 本公司提供系列免疫印迹显色试剂产品

质量标准

• 本产品经鉴定性能稳定
• 本产品经鉴定显影清晰