通用型二氨基联苯胺（DAB）显色溶液产品说明书（中文版）

主要用途

通用型二氨基联苯胺（DAB）显色溶液是一种旨在通过过氧化物酶的催化，底物二氨基联苯胺氧化形成棕褐色不溶性产物，以此鉴定过氧化物酶活性，进而确定目标分子表达的实验辅助试剂。其适用于辣根过氧化酶标记蛋白的免疫学检测包括蛋白质西方杂交和免疫化学，以及原位杂交染色等。产品即到即用，性能稳定，操作便捷，敏感度高，显色清晰，重复性好。

技术背景

二氨基联苯胺（3,3’-diaminobenzidine，DAB）是过氧化物酶（Peroxidase）的生色底物，在过氧化物酶的催化下，电子供体DAB底物在过氧化氢氧化下失去电子，而呈现出颜色变化和沉积，形成棕褐色不溶性产物，且不受乙醇影响。被用于检测过氧化物酶的活性，灵敏度高，特异性好。

产品内容

染色液（Reagent A）  1瓶

稀释液（Reagent B） 10毫升

反应液（Reagent C）    90毫升

产品说明书      1份

保存方式

保存染色液（Reagent A）在－20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里；染色液（Reagent A），避免光照，有效保证6月

用户自备

甲基绿复染试剂盒（GMS40010）或苏木素复染试剂盒（GMS80050）：用于常规染色后复染

15毫升锥形离心管：用于染色工作液配制的容器

平式摇荡仪：用于孵育和混匀反应

2.2毫升离心管：用于配制染色工作液的容器

光学显微镜：用于细胞染色后观察分析

实验步骤

• 免疫印迹染色

实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的染色液（Reagent A）置于室温下均衡温度，然后加入10毫升稀释液（Reagent B），使其充分溶解。分别移出1毫升溶解后的染色液（Reagent A）和9毫升反应液（Reagent C）到15毫升锥形离心管，混匀后标记为染色工作液，避免光照。溶解后的染色液（Reagent A）即刻放回－20℃冰箱里。然后进行下列操作。

• 准备好含有待测蛋白的固相膜（5 X 8 cm2）：包括电泳、转印、封阻、一抗（或生物素）处理、辣根过氧化酶（HRP）标记的二抗（或链霉亲和素）处理、清洗等步骤
• 加入5毫升室温预热的染色工作液，铺满整个固相膜表面
• 置于平式摇荡仪上，在室温下孵育2至5分钟，或直至棕褐色沉淀出现；避免光照
• 用镊子夹起固相膜，放进无离子水里清洗
• 空气中晾干
• 数码相机拍照记录

• 免疫化学染色

实验开始前，将－20℃冰箱里试剂盒中的染色液（Reagent A）置于室温下均衡温度，然后加入10毫升稀释液（Reagent B），使其充分溶解。分别移取200微升溶解后的染色液（Reagent A）和1.8毫升反应液（Reagent C）到2.2毫升离心管，充分混匀，标记为染色工作液，置于暗室。溶解后的染色液（Reagent A）即刻放回－20℃冰箱里。然后进行下列操作：

• 准备好含有待测蛋白的组织切片：包括固着、封阻、一抗（或生物素）处理、辣根过氧化酶（HRP）标记的二抗（或链霉亲和素）处理、清洗等步骤
• 室温下，小心加上100微升的染色工作液，铺满整个切片样品表面
• 室温下孵育5至30分钟，或直至样本出现棕褐色
• 小心移去切片上的染色工作液
• 室温下，小心将切片置入50毫升PBS缓冲液中浸泡5秒
• 小心移去切片上的PBS缓冲液
• （选择步骤）进行甲基绿复染（建议使用甲基绿复染试剂盒－GMS40010或苏木素复染试剂盒－GMS80050）
• 放上盖玻片或封片
• 即刻在一般光学显微镜下观察：阳性呈现棕褐色

注意事项

• 本产品总量为100毫升
• 可用于1000 cm2免疫印迹膜片：建议5毫升用于1张5 X 8 cm2膜片
• 可用于1000片1 cm X 1 cm大小的组织切片
• 用户可以根据需求，调整试剂用量
• 操作时，须戴手套
• 染色时间根据情况调整，不能过长，以免造成过度染色
• 如果封闭欠佳，易造成背景颜色过深
• 染色液具有毒性或刺激性
• 染色工作液不能储存后使用；如果发现沉淀，不宜使用
• 固相膜染色后数小时将会褪色，不能永久存在
• 本产品只能用于辣根过氧化酶（HRP）标记的杂交和沉淀反应
• 染色后可用甲基绿或苏木素复染，增强对照；建议使用甲基绿复染试剂盒－GMS40010或苏木素复染试剂盒－GMS80050
• 本公司提供系列组化染色试剂

 质量标准

• 本产品经鉴定性能稳定
• 本产品经鉴定显色清晰