总RNA样品mRNA选择纯化试剂盒
总RNA样品mRNA选择纯化试剂盒产品说明书（中文版）
主要用途
总RNA样品mRNA选择纯化试剂是一种旨在针对富含RNA酶的组织或细胞样品，采取分步实施，在先完成总RNA提取之后，进一步通过亲和树脂特异结合的技术处理，以获得高纯度poly A＋ RNA的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种总RNA样品（人体、动物、植物等）的mRNA提取。产物可以直接用于Northern杂交、斑点杂交、体外翻译、RNA分解酶的保护分析、RT-PCR、miRNA、构建cDNA文库、SAGE技术等各种后续分子生物学实验。产品即到即用，性能稳定，无核酶污染，操作简便，产物纯度高，重复性好，堪称国际上同类产品最佳。
技术背景
组织或细胞样品中富含RNA酶，容易导致RNA的降解。为了避免直接纯化mRNA时，RNA酶的污染和干扰，通过足量异硫氰酸胍（guanidine isothiocyanate）的作用，获得总RNA。然后通过oligo dT树脂的完全结合，有效达到纯化mRNA的目的。
产品内容
平衡液（Reagent A） 3毫升
亲和液（Reagent B） 2.5毫升
高盐液（Reagent C） 30毫升
低盐液（Reagent D） 15毫升
洗脱液（Reagent E） 5毫升
浓缩液（Reagent F） 500微升
沉淀液（Reagent G） 10毫升
净化液（Reagent H） 10毫升
保存液（Reagent I） 1.5毫升
离心柱 10套
产品说明书 1份
保存方式
保存亲和液（Reagent B）和浓缩液（Reagent F）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，有效保证6月
用户自备
1.5毫升离心管：用于核酸纯化的容器
微型台式离心机：用于核酸沉淀
涡旋震荡仪：用于混匀
平式摇荡仪：用于混匀和孵育反应物
实验步骤
实验开始前，从－20℃冰箱里取出亲和液（Reagent B）置于冰槽里融化；然后摇匀亲和液（Reagent B），移取250微升到新的1.5毫升离心管，放进4℃微型台式离心机瞬时离心15秒，小心抽掉上清液，置入冰槽里备用。同时将洗脱液（Reagent E）放进65℃恒温水槽里预热。然后进行下列操作：
- 从－70℃冰箱里取出总RNA样品，置于冰槽里融化
- 移取250微升（总量0.5至1毫克总RNA）到1.5毫升离心管
- 加入250微升平衡液（Reagent A）
- 涡旋震荡5秒
- 放进微型台式离心机瞬时离心15秒
- 移入含有亲和液（Reagent B）的1.5毫升离心管
- 涡旋震荡5秒
- 平放在平式摇荡仪上室温下孵育15分钟，速度为100RPM
- 放进微型台式离心机瞬时离心15秒
- 小心抽去上清液
- 加入1毫升高盐液（Reagent C），用手混匀
- 放进微型台式离心机瞬时离心15秒
- 小心抽去上清液
- 重复实验步11至13二次
- 加入1毫升低盐液（Reagent D），用手混匀
- 放进微型台式离心机瞬时离心15秒
- 小心抽去上清液
- 加入500微升低盐液（Reagent D），用手混匀
- 转移到离心柱
- 放进微型台式离心机瞬时离心15秒
- 更换1.5毫升收集管
- 加入200微升65℃预热的洗脱液（Reagent E）到离心柱
- 室温下静置1分钟
- 放进微型台式离心机离心2分钟，速度为16000g（13000RPM 例如eppendorf 5415）
- 重复实验步骤22至24一次
- 扔掉离心柱
- 加入50微升浓缩液（Reagent F）
- 加入1毫升沉淀液（Reagent G），用手上下倾倒混匀
- （选择步骤）放进－70℃冰箱里孵育10分钟
- 放进微型台式离心机离心15分钟，速度为16000g（13000RPM 例如eppendorf 5415）
- 小心抽去上清液
- 加入1毫升净化液（Reagent H）
- 放进4℃微型台式离心机离心5分钟，速度为16000g（13000RPM 例如eppendorf 5415）
- 小心抽去上清液
- 空气中晾干
- 加入50微升保存液（Reagent I）
- 放进－70℃冰箱里储存备用
- 或计算mRNA浓度：
- 移取1微升mRNA样品到1.5毫升离心管
- 加入100微升保存液（Reagent I）,混匀
- 即刻移入到100微升规格的石英比色杯
- 放进分光光度仪：波长为260nm
- 浓度为：微克/微升＝OD260 X 4
注意事项
- 本产品为10次操作
- 整个操作须戴手套，切莫触碰操作液体
- 建议使用滤芯枪头，并格外小心，防止降解RNA
- 建议所有的操作用品属于RNA专用
- 总RNA提取后，清洗干净，避免过度酸性
- 通常1毫克总RNA样品可以提取10微克mRNA量
- 亲和液（Reagent B）可以再生处理，重复使用；建议使用-mRNA纯化树脂再生试剂盒（20101）
- 本公司提供系列RNA产品
质量标准
- 本产品经鉴定性能稳定
- 本产品经鉴定无核酶成分
- 本产品经鉴定纯化程度高
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