石蜡切片组织细胞色素C免疫荧光检测试剂盒产品说明书（中文版）

主要用途

石蜡切片组织细胞色素C免疫荧光检测试剂是一种旨在使用标准化的化学分离石蜡方法和抗细胞色素C单克隆抗体以及荧光染料缀合物二抗的应用，在线粒体特异性荧光染料的帮助下，通过荧光显微镜分析存档中的石蜡包埋的组织切片中细胞区室（线粒体和细胞浆）的细胞色素C的分布状态，从而观察分析细胞凋亡的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。主要适用于各种动物和人体组织石蜡包埋切片的细胞色素C分析。广泛用于细胞生物学的研究。产品严格无菌，即到即用，反应敏感，操作简捷，性能稳定，荧光清晰。

技术背景

细胞色素C（CYTOCHROME C）在细胞凋亡中扮演着重要作用。细胞色素C位于线粒体内外膜之间。当细胞凋亡时，它从线粒体内释放到细胞浆里，引起一系列的信号通道的下游反应。通常使用免疫组化方法，即通过不同波长的荧光染料的重叠染色，检测其分布，反映细胞凋亡和细胞通路等。 

产品内容

脱蜡液（Reagent A）             150毫升

补水液A（Reagent B）     50毫升

补水液B（Reagent C）     50毫升

补水液C（Reagent D）     50毫升

补水液D（Reagent E）     50毫升

清理液（Reagent F）         20毫升

修复液（Reagent G）          2毫升

封阻液（Reagent H）          2毫升

抗体液（Reagent I）          1毫升

染色液（Reagent J）          1毫升

重染液（Reagent K）         10微升

抗淬灭液（Reagent L）        500微升

强化液（Reagent M）    100毫升

产品说明书     1份

保存方式

保存修复液（Reagent G）、封阻液（Reagent H）、抗体液（Reagent I）、染色液（Reagent J）、重染液（Reagent K）和抗淬灭液（Reagent L）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里；抗体液（Reagent I）和染色液（Reagent J）严禁反复冻融； 染色液（Reagent J）、复染液（Reagent K）和抗淬灭液（Reagent L）避免光照；有效保证6月

用户自备

1.5毫升离心管：用于配制重染工作液的容器

盖玻片：用于封片孵育

小型染色缸：用于脱蜡的操作

烘箱：用于脱蜡处理

（共聚焦）荧光显微镜：用于组织细胞荧光观察

实验步骤

• 脱蜡处理

• 取出10片待测的10微米厚的石蜡包埋的组织切片 
• 放进80℃烘箱，孵育30分钟
• 室温下静置15分钟
• 按下表依次放进小染色缸里孵育

• 小心移去切片上的补水液D（Reagent E）
• 小心加上200微升清理液（Reagent F）在切片上，铺满整个切片样品表面
• 室温下孵育5分钟
• 小心移去切片上的清理液（Reagent F）

二、样品预处理

实验开始前，将－20℃冰箱里试剂盒中的试剂置入冰槽里融化。然后进行下列操作：

• （选择步骤）将切片置于100毫升烧杯，加入50毫升强化液（Reagent M）
• （选择步骤）放进微波炉里加热5分钟：其中15秒煮沸后，间隙15秒后再煮沸，直至5分钟
• （选择步骤）室温下，冷却20分钟
• 加入200微升修复液（Reagent G）在切片上，铺满整个切片样品表面
• 室温下孵育5分钟
• 小心抽去修复液（Reagent G）
• 空气中晾干
• 加入200微升清理液（Reagent F）在切片上，铺满整个切片样品表面
• 室温下孵育5分钟
• 小心抽去清理液（Reagent F）
• 加入200微升封阻液（Reagent H）在切片上，铺满整个切片样品表面
• 室温下孵育60分钟
• 小心抽去封阻液（Reagent H）

• 样品染色处理

实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的重染液（Reagent K）置入冰槽里融化，然后分别移出100微升清理液（Reagent F）和1微升重染液（Reagent K）到新的1.5毫升离心管，标记为重染工作液，并放在暗室里备用。然后进行下列操作。

• 加入100微升抗体液（Reagent I）在切片上，铺满整个切片样品表面
• 盖上盖玻片，室温下孵育2至16小时（注意：避免气泡；参见注意事项8）
• 小心移去盖玻片，抽去抗体液（Reagent I）
• 加入200微升清理液（Reagent F）在切片上，铺满整个切片样品表面
• 室温下孵育5分钟
• 小心抽去清理液（Reagent F）
• 重复实验步4至6二次
• 加入100微升染色液（Reagent J）在切片上，铺满整个切片样品表面
• 室温下孵育30分钟，避免光照（注意：避免气泡）
• 小心抽去染色液（Reagent J）
• 加入200微升清理液（Reagent F）在切片上，铺满整个切片样品表面
• 室温下孵育5分钟
• 小心抽去清理液（Reagent F）
• 重复实验步11至13二次
• 加入100微升重染工作液在切片上，铺满整个切片样品表面
• 室温下孵育20分钟，避免光照
• 小心抽去复染工作液
• 加入200微升清理液（Reagent F）在切片上，铺满整个切片样品表面
• 室温下孵育5分钟
• 小心抽去清理液（Reagent F）
• 重复实验步18至20二次
• 加入50微升抗淬灭液（Reagent L）
• 盖上盖玻片或封片
• 即刻在（共聚焦）荧光显微镜下观察

注意事项

• 本产品为10次操作
• 操作时须戴手套，以防污染
• 石蜡包埋前，组织切片须用10％甲醛4℃条件下，固定16小时，否则造成样品支离破碎
• 所有操作在室温下进行
• 每次更换试剂溶液时，保持切片面基本晾干。空气中晾干状态为没有水滴，呈湿润状态，可见反光
• 试剂溶液在切片表面时，避免有气泡存在，同时确保铺满切片表面
• 染色和重染孵育时，须避免光照
• 抗体液（Reagent I）孵育，可以持续16小时
• 建议染色完成后，即刻进行荧光显微镜观察 
• 本公司提供系列细胞色素C检测试剂产品

质量标准

• 本产品经鉴定性能稳定
• 本产品经鉴定荧光清晰