冰冻切片胶原纤维马森（MASSON）染色试剂盒产品说明书（中文版）

主要用途

冰冻切片胶原纤维马森（MASSON）染色试剂是一种旨在使用胞核-胞浆-胶原蛋白三色染料（trichrome），分析和区分存档中的冰冻组织切片中的胶原纤维（collagen fiber） 的权威而经典的技术方法。该技术经过精心改良传统方法、成功实验证明的。主要适用于胶原蛋白和平滑肌的鉴别分析。广泛用于结缔组织、肌肉组织和胶原蛋白的研究等。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，显色清晰。

技术背景

基于摩罗利 （mallory）首次应用三色系统的方法，马森（masson）进行了改良，在三色复合染料体系中，使用苯胺篮（aniline blue）替代绿篮，作为胶原蛋白的染色。三色复合染料选择性地染色肌肉、胶原纤维、纤维蛋白（fibrin）和红细胞。肝肾疾病，例如纤维化（cirrhsis）等，其胶原蛋白增多。

产品内容

清理液（Reagent A）  200毫升

包氏液（Reagent B）  100毫升

韦格液A（Reagent C）    5毫升

韦格液B（Reagent D）    5毫升

比氏液（Reagent E）   10毫升

酸性液（Reagent F）   10毫升

染色液（Reagent G）   10毫升

修正液（Reagent H）   10毫升

产品说明书    1份

保存方式

保存在4℃冰箱里，避免光照；试剂具有腐蚀性，注意安全；有效保证3月

用户自备

小型玻璃染色缸：用于组织或切片处理的容器

培养箱：用于样品反应孵育

微波炉：用于样品反应孵育处理

载玻片和盖玻片：用于切片后铺片

中性树脂：用于切片封片

光学显微镜：用于切片染色后观察分析

实验步骤

样本染色开始前，将试剂盒里的韦格液A（Reagent C）和韦格液B（Reagent D）置于室温下预热，并避光。然后分别移取100微升到1.5毫升离心管里，充分混匀后，标记为韦格工作液，即刻使用。

操作一：标准染色

• 准备好4微米厚的冰冻切片
• 小心加上200微升清理液（Reagent A）在切片上，铺满整个切片样品表面
• 室温下孵育5分钟
• 小心移去切片上的清理液（Reagent A）
• 小心加入500微升包氏液（Reagent B）在切片上，铺满整个切片样品表面
• 放进60℃恒温培养箱孵育60分钟（注意：避免干枯；如果强化效果，可以室温孵育16小时）
• 小心移去包氏液（Reagent B）
• 室温下，小心将切片置入50毫升清理液（Reagent A）中孵育2分钟
• 小心移去切片上的清理液（Reagent A）
• 小心加入200微升韦格工作液在切片上，铺满整个切片样品表面
• 室温下孵育10分钟
• 小心移去韦格工作液
• 室温下，小心将切片置入50毫升清理液（Reagent A）中孵育5分钟
• 小心移去切片上的清理液（Reagent A）
• 小心加入200微升比氏液（Reagent E）在切片上，铺满整个切片样品表面
• 室温下孵育5分钟（注意：可以延长至15分钟，增强染色效果）
• 小心移去比氏液（Reagent E）
• 小心加入200微升清理液（Reagent A）在切片上，铺满整个切片样品表面
• 小心移去切片上的清理液（Reagent A）
• 重复实验步骤18至19二次
• 小心加入200微升酸性液（Reagent F）在切片上，铺满整个切片样品表面
• 室温下孵育10分钟（注意：可以孵育15分钟，增强染色效果）
• 小心移去切片上的酸性液（Reagent F）
• 小心加上200微升 染色液（Reagent G）在切片上，铺满整个切片样品表面
• 室温下孵育5分钟，避免光照（注意：可以延长至10分钟，增强染色效果）
• 小心移去切片上的染色液（Reagent G）
• 小心加上200微升 修正液（Reagent H）在切片上，铺满整个切片样品表面
• 室温下孵育2分钟
• 小心移去切片上的修正液（Reagent H）
• 室温下，小心将切片置入50毫升清理液（Reagent A）中孵育2分钟
• 小心移去切片上的清理液（Reagent A）
• 放上盖玻片或封片（中性树脂）
• 即刻在一般光学显微镜下观察：

细胞核――呈现黑色

细胞质――呈现红色

肌纤维――呈现红色

红细胞――呈现红色

胶原纤维――呈现蓝色

操作二：热处理染色

• 准备好4微米厚的冰冻切片
• 小心加上200微升清理液（Reagent A）在切片上，铺满整个切片样品表面
• 室温下孵育5分钟
• 小心移去切片上的清理液（Reagent A）
• 准备1个100毫升烧杯或小型染色缸
• 加入50毫升包氏液（Reagent B）
• 小心放进上述脱腊处理的切片
• 放进微波炉（600瓦）加热1分钟
• 室温下静置15分钟
• 取出切片，小心移去切片上的包氏液（Reagent B）
• 室温下，小心将切片置入50毫升清理液（Reagent A）中孵育5分钟
• 小心移去切片上的清理液（Reagent A）
• 小心加入200微升韦格工作液在切片上，铺满整个切片样品表面
• 室温下孵育10分钟
• 小心移去韦格工作液
• 室温下，小心将切片置入50毫升清理液（Reagent A）中孵育5分钟
• 小心移去切片上的清理液（Reagent A）
• 小心加入200微升比氏液（Reagent E）在切片上，铺满整个切片样品表面
• 室温下孵育5分钟（注意：可以延长至15分钟，增强染色效果）
• 小心移去比氏液（Reagent E）
• 小心加入200微升清理液（Reagent A）在切片上，铺满整个切片样品表面
• 小心移去切片上的清理液（Reagent A）
• 重复实验步骤21至22二次
• 小心加入200微升酸性液（Reagent F）在切片上，铺满整个切片样品表面
• 室温下孵育10分钟（注意：可以延长至15分钟，增强染色效果）
• 小心移去切片上的酸性液（Reagent F）
• 小心加上200微升 染色液（Reagent G）在切片上，铺满整个切片样品表面
• 室温下孵育5分钟，避免光照（注意：可以延长至10分钟，增强染色效果）
• 小心移去切片上的染色液（Reagent G）
• 小心加上200微升 修正液（Reagent H）在切片上，铺满整个切片样品表面
• 室温下孵育1分钟
• 小心移去切片上的修正液（Reagent H）
• 室温下，小心将切片置入50毫升清理液（Reagent A）中孵育2分钟
• 小心移去切片上的清理液（Reagent A）
• 放上盖玻片或封片（中性树脂）
• 即刻在一般光学显微镜下观察：

细胞核――呈现黑色

细胞质――呈现红色

肌纤维――呈现红色

红细胞――呈现红色

胶原纤维――呈现蓝色

注意事项

• 本产品为50次操作
• 操作时，须戴手套
• 试剂具有腐蚀性，注意操作安全 
• 建议使用玻璃染色缸
• 每次更换试剂溶液时，保持切片面基本晾干
• 试剂溶液在切片表面时，避免有气泡存在，同时确保铺满切片表面
• 整个操作，在避光状态下进行
• 孵育时间可以根据样品的不同、染色深浅的不同而延长或缩短
• 染色完成后，即刻进行光学显微镜观察 
• 样品染色后保存，避免光照
• 本公司提供系列特定组织染色试剂产品

质量标准

• 本产品经鉴定性能稳定
• 本产品经鉴定显色清晰