RIP技术服务 rip实验结果分析 辉骏生物
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一、RIP实验技术概述-辉骏生物
RIP是研究体内蛋白与RNA互作的重要技术。该技术先用甲醛等试剂交联细胞内的“蛋白-RNA”互作复合物，裂解细胞后，用靶蛋白特异的抗体（或标签抗体）做免疫沉淀，获得“靶蛋白-RNA”互作复合物，去交联分离其中的RNA；针对预测的靶蛋白结合RNA的序列设计引物，做qPCR实验，验证预测的RNA是否与靶蛋白有结合；或者将分离出来的RNA做高通量测序，筛选到可能与靶蛋白结合的RNA。
二、RIP技术应用-辉骏生物
目的蛋白的互作RNA筛选。
三、RIP技术流程-辉骏生物
细胞交联→细胞裂解→免疫共沉淀→去交联→RNA分离→建库→高通量测序（或qPCR）。
带标签的RNA免疫共沉淀流程图：
四、RIP实验服务信息-辉骏生物
| 项目名称 | 客户提供 | 结果交付 |
| RIP-qPCR | 1. 蛋白信息（物种、序列） 2. 蛋白抗体 3. 细胞系及培养信息 4. 待验证的基因信息（物种、序列） |
1. 原始结果图（包括Input、阳性及阴性对照结果） 2. qPCR结果； 3. 完整实验报告（包括实验材料、方法、结果分析） |
| RIP-seq | 1. 蛋白信息（物种、序列） 2. 蛋白抗体 3. 细胞系及培养信息 |
1. 原始结果图（input和洗脱液的SDS-PAGE图） 2. 高通量测序结果 3. 完整实验报告（包括实验材料、方法、结果分析） |
RNA免疫共沉淀RIP实验—辉骏生物客户案例
目前的研究显示，一种长链非编码RNA(LncRNA)“PART1”在某些癌症中有抑癌作用，在某些癌症中又有致癌作用。人类胃癌组织的GEO芯片数据显示，lncRNA PART1在胃癌中显著下调，TCGA数据库和GEPIA数据库信息显示低水平的lncRNA PART1更容易导致肿瘤转移和患者生存期缩短；但其临床意义和潜在机制尚未明确。
1 细胞、CAM和小鼠实验均表明PART1水平与胃癌的恶性程度、转移能力呈负相关
2 RNA-seq实验发现高表达的PART1下调了PI3K-Akt通路的一些基因，上调了肿瘤抑制基因PLZF，肿瘤组织检测和TCGA数据库资料确定了该结果
3 RNA pull-down结合质谱鉴走技术首次发现了PART1的潜在结合蛋白——AR(已有研究表明AR可以激活前列腺瘟中的PLZF并抑制其增殖
4 RNA pull down WB和 RIP qPCR实验确定了PART1与AR的相互作用
5 ChIP和双荧光素酶实验表明AR与PLZF启动子的2个位点结合，PLZF启动子因AR、PART1的单独作用或两者的协同作用而激活
6 数据库调查和Co-IP结果均显示PIZF蛋白与EZH2蛋白结合
7 ChIP-qPCR结果表明PI3K-Akt通路蛋白PDGFB的启动子与PIZF、EZH2蛋白结合、且该区域发生H3K27me3修饰
功能回复实验表明， PDGFB过表达可以部分回复PART1对GC细胞生长、迁移和侵袭、等能力的抑制
lncRNA PART1是胃癌的肿瘤抑制因子，可以作为GC转移和预后的预测因子。新发现的PART1作用机制是：PART1与AR相互作用，以雄激素非依赖性的模式激活肿瘤抑制因子PLZF，之后PLZF蛋白和EZH2蛋白相互作用，导致PI3K-Akt通路基因PDGFB的启动子发生H3K27me3修饰，从而使促癌基因PDGFB的转录活性受到抑制。
RIP实验客户文献-辉骏生物
Han H. et al: Long noncoding RNA PART1 restrains aggressive gastric cancer through the epigenetic silencing of PDGFB via the PLZF-mediated recruitment of EZH2. Oncogene. 2020. (IF=9.867)
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经过10多的不断努力与开拓进取，辉骏生物已经拥有一支经验丰富、优秀刻苦的蛋白质组学实验及蛋白核酸互作技术队伍。公司各类实验的技术人员均有着深厚的理论基础和丰富的实验经验。本公司秉承着严谨科学、优质高效、不断完善的服务理念，以蛋白质组学为中心，函括各类蛋白核酸互作、分子生物学、抗体测序等实验。面向生物医药企业、院校、科研机构、医院和个人，为生物医药研发、生命科学和医学研究提供全方位蛋白质组学实验解决方案。目前，我们已经与中科院华南植物研究所、广州肿瘤医院、中山大学、浙江大学、武汉大学、上海海洋大学、西南大学、厦门大学等全国60多家科研单位建立了广泛的项目合作。
感谢多年来广大客户对辉骏生物的支持与信任，我们将一如既往地为大家提供优质、高效、精准的各类包括蛋白质组学、核酸蛋白互作、分子\细胞生物学、免疫沉淀试剂盒、抗体测序等着方面实验技术服务。本着客户至上的理念，辉骏生物科技的所有员工将竭诚为您服务，按时按质地向您提供各类实验报告。
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