CRISPR/Cas9整体实验服务
基本信息
产品名称：
CRISPR/Cas9整体实验服务
英文名称：
国产/进口：
国产
产地/品牌：
JIAMAY
型号：
嘉美实验
参考报价：
销售商：
总点击数：
1681
更新日期：
2019-01-17
产品类别：
性能参数
1、提供项目CRISPR/Cas9整体实验方案：客户根据课题标书及需做实验的主体内容，拟定并提供初步的项目方案，含课题申请书，实验方案，实验设计，实验思路，实验文献等与实验相关等内容和资料。或者由嘉美实验协助实验委托者完成CRISPR/Cas9整体实验方案的设计。
2、项目评估报价：公司技术团队根据客户提供的相关资料，综合评估项目可行性，与客户共同确定准确的实验项目执行方案，给出准确的实验价格。嘉美实验协助设计的课题直接给出准确的报价。
3、签订服务协议：签署服务协议并预付部分费用，做好实验初步准备及项目预安排。
4、执行服务项目：正式启动实验进程，全面展开实验，确保项目有效执行。
5、沟通项目进展：及时沟通反馈实验的最新进展，随时了解掌控实验的最新动态。
6、完成项目交付：支付剩余尾款，交付实验结果，正确应用实验结果，提供售后服务。
一、嘉美实验构建的CRISPR/Cas9 基因编辑稳定细胞株案例的实验步骤
嘉美实验拥有完善的 CRISPR/Cas9 载体系统，包括单敲除，双敲除，缺口酶、慢病毒敲除载体和敲除载体库等体系。并且每一个载体系统都有不同的标签（EGFP/RFP/Puro/Neo）可供选择。同时，拥有 100 余种基因敲除的项目经验，可以快速、准确、高效的完成任何一个基因敲除的项目。
1、设计针对 Atg10基因的 gRNA并克隆到嘉美实验的 pGK1.1敲除载体中；
2、电转 pGK1.1（Atg10）载体至 K562细胞中；
3、Cruiser™酶切计算突变率（图1）；
4、单克隆筛选用 Cruiser™酶切验证获得潜在阳性克隆（图2）；
5、对潜在的阳性克隆进行测序验证，获得纯合子； 图1. Cruiser™酶切细胞池，计算突变率。
图3. 潜在阳性克隆测序比对结果
根据潜在阳性克隆单克隆测序验证结果，判断该株疑似阳性克隆的两个亲本都缺失11bp碱基，该株阳性克隆为纯合子敲除细胞株。
图2. CRISPR-Cas9介导的基因编辑。
（左）：sgRNA引导Cas9核酸酶作用于基因组，形成的DSBs被非同源末端连接（NHEJ）机制修复；
（右）：sgRNA引导Cas9核酸酶作用于基因组，形成DSBs，同源重组（HR）作用下，供体质粒上的目标基因及筛选标记（或其他遗传元件）在断裂处被整合进基因组。
2、项目评估报价：公司技术团队根据客户提供的相关资料，综合评估项目可行性，与客户共同确定准确的实验项目执行方案，给出准确的实验价格。嘉美实验协助设计的课题直接给出准确的报价。
3、签订服务协议：签署服务协议并预付部分费用，做好实验初步准备及项目预安排。
4、执行服务项目：正式启动实验进程，全面展开实验，确保项目有效执行。
5、沟通项目进展：及时沟通反馈实验的最新进展，随时了解掌控实验的最新动态。
6、完成项目交付：支付剩余尾款，交付实验结果，正确应用实验结果，提供售后服务。
一、嘉美实验构建的CRISPR/Cas9 基因编辑稳定细胞株案例的实验步骤
嘉美实验拥有完善的 CRISPR/Cas9 载体系统，包括单敲除，双敲除，缺口酶、慢病毒敲除载体和敲除载体库等体系。并且每一个载体系统都有不同的标签（EGFP/RFP/Puro/Neo）可供选择。同时，拥有 100 余种基因敲除的项目经验，可以快速、准确、高效的完成任何一个基因敲除的项目。
1、设计针对 Atg10基因的 gRNA并克隆到嘉美实验的 pGK1.1敲除载体中；
2、电转 pGK1.1（Atg10）载体至 K562细胞中；
3、Cruiser™酶切计算突变率（图1）；
4、单克隆筛选用 Cruiser™酶切验证获得潜在阳性克隆（图2）；
5、对潜在的阳性克隆进行测序验证，获得纯合子； 图1. Cruiser™酶切细胞池，计算突变率。
图3. 潜在阳性克隆测序比对结果
根据潜在阳性克隆单克隆测序验证结果，判断该株疑似阳性克隆的两个亲本都缺失11bp碱基，该株阳性克隆为纯合子敲除细胞株。
二、CRISPR-Cas系统介绍
CRISPR-Cas系统 The clustered, regularly interspaced, short palindromic repeats-associated protein systems）是一个细菌及古细菌进化出来用以抵御病毒和质粒入侵的适应性机制。CRISPR-Cas系统的高效基因组编辑功能已被应用于多种生物，包括斑马鱼、小鼠、大鼠、秀丽隐杆线虫、植物及细菌。多个科研小组的研究都显示，与锌指核酸酶（ZFNs）和转录激活样效应核酸酶（Transcription activator-like effector nucleases, TALEN）相比较，CRISPR-Cas系统介导的基因组靶向实验在细胞或斑马鱼中具有相似甚至更高的效率。在 II型CRISPR系统 中，CRISPR RNA（crRNA）与转录激活crRNA（Trans-activating crRNA, tracrRNA）退火形成的复合物能特异识别基因组序列，引导Cas9核酸内切酶在目的片段生成DNA双链断裂（double-strand breaks, DSBs）。 这个识别复合体可以通过融合crRNA与tracrRNA序列形成sgRNA（single-guided RNA）进行简化。基因组的靶序列中有长约20bp的片段与crRNA或sgRNA互补配对；靶序列末端的三核苷酸区域PAM（5’-NGG-3’）为Cas9识别位点，是实现剪切功能的关键。
CRISPR-Cas9体系 的RNA-DNA识别机制为基因 组工程研究提供了一项简便而强大的工具。该体系其中一个最重要的优势是Cas9蛋白可在多个不同的gRNA的引导下同时靶向多个基因组位点
图 1. CRISPR/Cas9介导的基因组编辑原理图
| 优势 | |
| RNA导向的基因组DNA识别，无需考虑DNA甲基化 | |
| 较ZFN和TALEN，有相同或更高的基因编辑效率 | |
| 可同时编辑多个基因（多重靶向编辑） | |
| 设计简单快速，无需重复构建核酸内切酶 |
图2. CRISPR-Cas9介导的基因编辑。
（左）：sgRNA引导Cas9核酸酶作用于基因组，形成的DSBs被非同源末端连接（NHEJ）机制修复；
（右）：sgRNA引导Cas9核酸酶作用于基因组，形成DSBs，同源重组（HR）作用下，供体质粒上的目标基因及筛选标记（或其他遗传元件）在断裂处被整合进基因组。
图3: 切口酶在结合链生产单链切口的原理图
| TALEN与CRISPR-Cas9体系对比 | ||
| 特性 | TALEN | CRISPR-Cas9 |
| 识别方式 | 蛋白质–DNA | RNA-DNA |
| 甲基化敏感性 | 敏感 | 不敏感 |
| 染色质结构敏感性 | 敏感 | 敏感 |
| 脱靶效应 | 较少观察到脱靶效应 | 潜在脱靶效应高于 TALEN 及ZFN |
| 多靶点操作 | 极少用 | 可用 |
公司简介
嘉美生物是一家专注于生物科学领域的高科技企业，公司成立于2005年，由在国内科研试剂领域有着十几年从业经验的专业、专家团队组建而成；2009年在北京重组，先后成立了北京嘉美诺斯生物科技有限公司（主要开展生物相关产品进、出口业务），北京嘉美纽诺生物科技有限公司（主要为大型药厂、诊断试剂公司提供服务）。
2010年，为了方便实验服务业务开展，成立了北京嘉美泰达商贸中心，专业运营实验服务相关业务。五年来，公司已经为全国各类科研用户提供了近5000个大大小小的实验外包服务或整体课题外包服务，实验项目涵盖了生命科学、医学的各个研究领域。2015年，公司管理与资质升级，专门成立了北京嘉美臻元生物技术有限公司从事实验外包服务平台的工作。
经过多年努力，公司已成为北京地区最大、最专业、最高效的生物实验外包服务平台。已成功为协和医院、301医院、北大人民医院、北大医院、北三医院、友谊医院、儿童医院、阜外医院、宣武医院、天坛医院、安贞医院、友好医院、广安门医院、东直门医院、军区总医院、朝阳医院等北京几十所大医院；北京大学、清华大学、首都医科大学、四川大学、中南大学、中山大学、华中科技大学、武汉大学、中科院等全国上百所科研院校以及研究所；武汉协和医院、武汉同济医院、西京医院、华西医院、广东省人民医院、中山附一、南方医院、珠江医院、湘雅医院等全国数百家医院提供了优质的实验外包服务。
嘉美生物面对医学院及其附属医院、医药科研院所、大学生命科学院、中科院、药企等类型单位提供单项和整体课题实验外包服务。对于科研任务繁重但工作繁忙而无暇分身的临床医生而言，我们的实验外包服务尤为需要，只需要实验委托者将课题交付我们，剩下的工作由嘉美生物完成，可以为实验委托者节约大量宝贵的时间和精力。对于面临毕业的广大硕博士而言，我们乐于一起探讨课题方案的合理性并给出建议，最大程度上优化实验方案和节约资金。对于课题也许您还只是个设想，嘉美生物却能将您的设想变为一个个成功的实验硕果。
嘉美生物所追求的目标不仅仅是一个科研课题实施的过程；我们更多的是关注实验前后的每个环节，真正成为实验委托者在医学和生命科学研究路上的良师益友。“专注生物技术，服务生命科学”，为您构筑医学和生命科学研究的一座座丰碑！
嘉美生物目前主要开展下列实验外包服务项目：
医学免疫学实验
1、凝胶电泳迁移率（EMSA）实验；
2、免疫沉淀（Co-IP）实验；
3、染色质免疫沉淀（CHIP）实验；
2、免疫沉淀（Co-IP）实验；
3、染色质免疫沉淀（CHIP）实验；
4、蛋白印迹（WB）实验；
5、激光共聚焦实验；
6、免疫组化实验；
7、多因子液相芯片技术（Luminex）实验；
8、酶联免疫吸附（EliSA）实验；
9、酶联斑点（Elispot）实验；
10、MHC多聚体定制检测实验
酶活性检测实验
1、NF-KB p65活性检测实验;
2、组蛋白甲基化/磷酸化/乙酰化检测实验；
3、凋亡因子Caspase-3/8/9检测实验；
4、酶活性检测实验；
5、抗氧化/自由基检测实验；
6、酪蛋白酶谱MMP(3/10)实验；
7、明胶酶谱MMP(2/9)实验；
8、PKC活性检测实验；
细胞生物学实验
1、细胞迁移与侵袭实验；
2、细胞膜片钳技术实验；
3、细胞克隆形成、划痕(修复)实验；
4、原代细胞培养实验；
5、细胞荧光染料标记检测实验；
6、细胞黏附能力、钙离子浓度检测实验；
7、细胞线粒体膜电位MMP检测实验；
8、细胞成脂、成骨、成神经诱导；
9、流式细胞实验；
10、细胞凋亡（ANNEXIN V、TUNEL）与增殖实验；
分子生物学实验
1、RNA干扰整体实验；
2、荧光素酶报告基因实验；
3、mRNA、miRNA荧光定量PCR实验；
4、甲基化检测实验；
5、端粒酶TRAP-PCR银染实验；
6、慢病毒载体构建包装与转染；
7、真核载体构建；
8、SNP基因多态性检测；
9、mRNA、miRNA原位杂交实验；
整体课题实验
1、临床医生、硕博研究生一站式整体课题外包；
2、教育部项目、国家自然科学基金、国家863，973整体课题外包；
3、RNA功能课题解决方案整体外包；
4、细胞信号转导课题解决方案整体外包；
5、表观遗传学整体解决方案实验；
6、干细胞&IPS整体课题解决方案实验；
7、转化医学整体实验；
8、癌症相关整体课题实验；
其他类型实验服务
1、蛋白质组学实验；
2、芯片、测序实验；
3、动物模型实验；
4、论文评估编译发表等服务
售后服务
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