细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

NBD-F[4-氟-7-硝基苯并呋咱] 超级纯NBD-F [4-Fluoro-7-nitrobenzofurazan] UltraPure grade
mFluor Violet 510-标记链霉亲和素偶联物 1 mg/mlmFluor Violet 510-streptavidin conjugate 1 mg/ml
AM694 N-pentanoic acid metabolite （10 mg）5-（3-（2-iodobenzoyl）-1H-indol-1-yl）pentanoic acid； AM694 N-pentanoic acid metabolite
Rivaroxaban （50 mg）BAY 59-7939|Xarelto； 5-chloro-N-[[（5S）-2-oxo-3-[4-（3-oxo-4-morpholinyl）phenyl]-5-oxazolidinyl]methyl]-2-thiophenecarboxamide
Ro 01-6128 （10 mg）N-（2，2-diphenylacetyl）-ethyl ester-carbamic acid； Ro 01-6128
Zerumbone （10 mg）（2E,6E）-2,6,9,9-tetramethyl-2,6,10E-cycloundecatrien-1-one
Phenylmethylsulfonyl fluoride （10 g）benzenemethanesulfonyl fluoride； PMSF|NSC 88499|Benzylsulfonyl fluoride； Phenylmethylsulfonyl fluoride
无水硫钾（100GM）Potassium Sulfate， Anhydrous， CAS # 777-80-5； Formula: K2SO4； FW: 174.26
8-iso-15-keto Prostaglandin E2 （100 ug）9，15-dioxo-11。alpha。-hydroxy-（8。beta。）-prosta-5Z，13E-1-oic acid； 8-epi-15-keto PGE2|8-iso-15-keto PGE2； 8-iso-15-keto Prostaglandin E2
3-bromo-5-phenyl Salicylic Acid （25 mg）5-bromo-4-hydroxy-[1，1’-biphenyl]-3-carboxylic acid； NSC 109116； 3-bromo-5-phenyl Salicylic Acid
Tris-HCl Stock Solution （1 M， pH 8。0） （250 mL）Tris-HCl Stock Solution （1 M， pH 8。0）
tetranor-PGEM-d6 （25 ug）9，15-dioxo-11α-hydroxy-13，14-dihydro-2，3，4，5-tetranor-prostan-17，17，18，18，19，19-d6-1，20-dioic acid； tetranor-Prostaglandin E Metabolite-d6； tetranor-PGEM-d6
 31.2-2000 pg/mL 人细胞因子信号转导抑制因子3(SOCS-3)ELISA试剂盒
 0.156-10 ng/mL 人神经元凋亡抑制蛋白(NAIP)ELISA试剂盒
PALCAM琼脂冻干配套试剂 每支添加于100ml（026070）中配成PALCAM琼脂。 10支
DSG1 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 WB    50 µg
小鼠杂交瘤细胞株；8B7培养XCL2 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 ELISA    50 µg
 0.312-20 ng/mL 人细胞色素p450 2B6(CYP2B6)ELISA试剂盒
 78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human Max dimerization protein 1
 12.5-800 U/mL 人UL-16结合蛋白-2（ULBP-2）ELISA试剂盒
CAMK2A 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 IHC-P    50 µg
亮绿乳糖液体培养基（BGB） 用于多管发酵法测定饮用矿泉水中大肠菌群的确证试验(GB/T8538-2008)。 250g
 0.312-20 ng/mL 人RuvB样蛋白1(RUVBL1)ELISA试剂盒
CD21 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 ELISA   WB  IHC-P   IP    50 µg

第一种：

是冻存产品，由液氮直接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。

第二种：

是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。

质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。

购买客户请先与我司细胞销售人员核实订购的细胞名称、种属、货号、数量、协商细胞价格并预约发货期与提取方式。向销售人员索取细胞说明书并认真阅读以方便你的实验操作。