细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

Compactin； ML-236BMevastatin
MAM2201 N-（5-chloropentyl） analog-d5 （1 mg）（1-（5-chloropentyl）-1H-indol-3-yl）（4-methylnaphthalen-1-yl-2，4，5，6，7-d5）methanone； JWH 122 N-（5-chloropentyl） analog-d5； MAM2201 N-（5-chloropentyl） analog-d5
（±）18-HEPE （25 ug）（±）-18-hydroxy-5Z，8Z，11Z，14Z，16E-eicosapentaenoic acid； （±）18-HEPE
BRD4770 （25 mg）HMTase Inhibitor VI； 2-（benzoylamino）-1-（3-phenylpropyl）-1H-benzimidazole-5-carboxylic acid, methyl ester
Transcription Factor p53 Designer Positive Control （1 ea）Transcription Factor p53 Designer Positive Control
Luotonin F （1 mg）2-（3-quinolinylcarbonyl）-4（3H）-quinazolinone
MAM2201 N-pentanoic acid metabolite-d5 （500 ug）5-（3-（4-methyl-1-naphthoyl）-1H-indol-1-yl-2，4，5，6，7-d5）pentanoic acid； JWH 122 N-pentanoic acid metabolite-d5； MAM2201 N-pentanoic acid metabolite-d5
17，20-dimethyl Prostaglandin F1α （1 mg）9。alpha。，11。alpha。，15S-trihydroxy-17S，20-dimethyl-prost-13E-en-1-oic acid； 17，20-dimethyl PGF1α； 17，20-dimethyl Prostaglandin F1α
10-methyl-9--phenoxycarbonyl) Acridinium fluorosulfonate (1 mg)PMAC, 10-methyl-9--phenoxycarbonyl) Acridinium fluorosulfonate, 1-methyl-9-(phenoxycarbonyl)acridinium, fluorosulfate
JWH 122 7-methylnaphthyl isomer （1 mg）（7-methyl-1-naphthalenyl）（1-pentyl-1H-indol-3-yl）-methanone； JWH 122 7-methylnaphthyl isomer
8-iso-17-phenyl trinor Prostaglandin F2β (10 mg)8-iso-17-phenyl trinor Prostaglandin F2β, 9.beta.,11.alpha.,15S-trihydroxy-17-phenyl-(8.beta.)-prosta-5Z,13E-dien-1-oic acid
Polygodial （10 mg）（1R，4aS，8aS）-1，4，4a，5，6，7，8，8a-octahydro-5，5，8a-trimethyl-1，2-naphthalenedicarboxaldehyde； Tadeonal； Polygodial
 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Uromodulin
Tie2 / CD202b / TEK 抗體 (FITC), 兔單抗 FCM    25 Test
ApoA1 抗體, 鼠單抗 WB   IF   ICC/IF   50 µg
CD19 抗體, 兔多抗 ELISA    400 µg
大鼠纤维母细胞；1/EJ 1-1培养DDR1 Kinase / MCK10 / CD167 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 ELISA   WB   IP   50 µg
 0.156-10 ng/mL 人含杆状病毒IAP重复蛋白6(BIRC6)ELISA试剂盒
 31.2-2000 pg/mL ELISA Kit for Human Inositol monophosphatase 1
Clusterin / Apolipoprotein J / Apo-J / CLU 抗體, 兔多抗 ELISA    400 µg
CD57 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 WB    50 µg
 0.312-20 ng/mL 人核细胞凋亡引导因子ELISA试剂盒
 12.5-800 pg/mL ELISA Kit for Human MAGUK p55 subfamily member 6
MICB / MIC-B 抗體 (PE), 鼠單抗 FCM    25 Test

第一种：

是冻存产品，由液氮直接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。

第二种：

是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。

质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。

购买客户请先与我司细胞销售人员核实订购的细胞名称、种属、货号、数量、协商细胞价格并预约发货期与提取方式。向销售人员索取细胞说明书并认真阅读以方便你的实验操作。