血清/培养基

CD56流式抗体

基本信息
产品名称:
CD56流式抗体
英文名称:
CD56-PE
国产/进口:
进口
产地/品牌:
西班牙 Cytognos
型号:
1 ml / 200 T
参考报价:
总点击数:
3539
更新日期:
2025-05-14
产品类别:

性能参数
预期用途
CD56试剂是一种与不同荧光色素偶联的单克隆抗体(mAb),设计用于流式细胞术鉴定和计数表达CD56抗原的细胞作为直接免疫荧光试剂。本试剂必须经流式细胞仪检测合格方可使用。
 
程序规则
流式细胞术是在单个细胞的基础上同时分析不同细胞特征的一项创新技术。这是通过在一组光探测器前依次排列通过的细胞的水动力聚焦来实现的;同时它们被激光束照亮。细胞与激光束的相互作用产生两种不同的信号:一种是由分散光(FSC/SSC)产生的信号,主要反映细胞的大小及其内部的复杂性;这些信号变成电脉冲,电脉冲被放大并登记为数字信号,由计算机处理。
 
当试剂被添加到样品中时,荧光色标记的单抗在试剂中出现,并与它们所针对的抗原特异性结合,从而允许通过流式细胞术检测抗原携带的细胞群。
利用红细胞裂解液在细胞仪上采集标本,消除了可能阻碍检测目标人群的红细胞群。推荐使用QuicklysisTM (CYT-QL-1)红细胞溶解液,因为它不需要进一步的清洗步骤,也不含固定剂,因此可以最大限度地减少样品的处理,避免细胞在离心过程中丢失。(1、2)
 
anti-CD56 mAb能够识别NK细胞和CD3+CD4+、CD3+CD8+ T细胞亚群上存在的CD56抗原,因此可以用于果蝇细胞免疫表型的表征研究。这些研究广泛应用于监测移植后患者的免疫状态,以及免疫缺陷、自身免疫性疾病、白血病等的表征和随访(3,4)。
 
NK细胞(CD3-CD56+)计数以样本中淋巴细胞或白细胞总数的百分比表示,其本身可由FC根据其典型的FSC/SSC模式(大小/粒度或复杂性)确定。由于每个流式细胞仪的操作特点不同,每个实验室必须确定其最佳操作程序。
 
试剂成分
纯化的单克隆抗体anti-CD56与不同荧光色素偶联(见上表),以< 0.01 (m/v)叠氮化钠的磷酸盐缓冲盐水供应。
克隆:C5.9
同形像统计图:IgG2b
净化:亲和色谱法
规格:200次(每瓶1毫升)
用法:5µl马伯的决心。
试剂并不被认为是无菌的。
 
储存条件
试剂稳定,直到标签上显示的截止日期,当储存在2 - 8ºc试剂不应该被冻结或暴露在直射光在孵化期间存储或样本。将试剂瓶放在干燥处。一旦打开,小瓶必须储存在一个垂直的位置,以避免任何可能的溢出。
 
稳定
该试剂的有效期由使用过程中的稳定性测定决定。如果满足上述存储条件,则保证试剂在标签上显示的过期日期之前正常工作。
 
警告和建议
1. 用于体外诊断。
2. 本产品已供应使用。若因稀释或添加其他成分而改变,将不能用于体外诊断。
3.试剂外观的改变,如沉淀或变色,表明不稳定或变质。在这种情况下,不应使用试剂。
4. 它含有<0,1% (m/v)叠氮化钠(as - nr)。(26628-22-8)作为防腐剂,但即使如此,也应小心避免微生物污染试剂或可能发生不正确的结果。
•叠氮化钠(NaN3)如果吞食是有害的(R22)。如不慎吞食,请立即就医,并出示此容器或标签(S46)。
•穿戴合适的防护服(S36)。
•与酸接触释放出剧毒气体(R32)。
叠氮化合物应作为危险废物处理(S60)。
5. 所有与患者接触的样本和材料都被认为是生物危害,处理时应像能够传播感染一样(3),并按照针对这类产品制定的法律预防措施进行处理。还建议使用适当的防护手套和衣物来处理该产品,并由完全符合所述程序的人员使用。避免样本与皮肤和粘膜接触。与皮肤接触后,立即用大量清水冲洗。
6. 使用与推荐的孵育时间或温度不同的试剂可能会导致错误的结果。任何此类更改都必须由用户验证。
7. 任何与产品有关的严重事件都必须向细胞团学S.L.以及用户所在成员国的主管专业机构报告
过程
材料包括
Anti-CD56马伯足够200年决定(5µl马伯106细胞)
所需材料,但不包括在内
•配备适当的激光和带通滤波器,以及适当的计算机硬件和软件的流式细胞仪。
•用于流式细胞仪中获取样本的试管。通常使用底部为6毫升,直径为12x75毫米的圆管。
•自动吸管和喷嘴
•天文钟
•旋涡混合器
•快速连续溶解溶液
•洗涤缓冲液为含< 0.01 (m/v)叠氮化钠的磷酸盐缓冲盐水(PBS)
准备
样品必须采取消毒包含一个适当的抗凝管(推荐使用EDTA)(6、7)。流式细胞术分析需要每管一百(100)µl示例,假设正常范围约为4至10 x 103每µl白细胞。样品高白细胞计数应与PBS稀释得到一个近似的细胞浓度1 x 104细胞/µl。样品储存在在18-22ºC,直到他们被测试。建议在提取后24小时内对样品进行检测。应拒绝含有悬浮细胞聚集物或溶血的样本
引导的过程:
1. 100年混合µl 5µl anti-CD56马伯的样本。
2. 在室温下黑暗中孵育15分钟。
3.加入2 ml速溶性红细胞溶出液,室温黑暗中孵育10分钟。
4. 用低速涡旋混合细胞以减少聚集。在样品制备完成后的前四小时内,直接用流式细胞仪采集。如果样品不收购后立即准备,他们应该储存在黑暗中2 - 8ºC。
5. 仪器的校准必须按照制造商的建议进行。在流式细胞仪上采集样本之前,调整阈值或鉴别器,以最小化碎片并确保包含感兴趣的人群。
*注意:使用其他溶出液可能需要消除溶出的红细胞。按照制造商推荐的方案使用裂解液。
流式细胞术分析
确认细胞计在光分散和荧光强度方面是正确对齐和标准化的。补偿应按照细胞仪制造商的说明进行设置。Cytognos推荐使用InfinicytTM(8)分析软件,该软件能够使用模式识别和存储分析策略来批量应用于其他样本。您将在www.infinicyt.com网站上找到关于InfinicytTM的完整信息。
目视CD56与SSC点图:NK细胞(CD3-CD56+)应呈低SSC的致密CD56+簇状。下图为抗体染色后外周血(健康人)流式细胞术的代表性数据。NK细胞群(红色为CD3-CD56+)和未染色细胞群(灰色为CD3-CD56-)清晰可见。
结果通常以样本中淋巴细胞或白细胞总数的百分比报告。
限制
•样本应该存储在在18到22岁的ºC和测试后在24小时内。
•建议尽快获得染色样本,以优化结果。非活细胞可能呈现非特异性染色。长时间将样品暴露于裂解试剂中可能导致白细胞破坏和目标群体细胞丢失。
•当使用全血溶解程序时,一些红细胞可能不会溶解,例如,如果存在有核的红细胞,或者观察到异常的蛋白浓度和血红蛋白病。这可能导致误导的结果,因为未分解的红细胞被视为白细胞。
•流式细胞术获得的结果可能是错误的,如果细胞激光没有对准或门设置不正确。
•通过密度梯度从全血中分离出来的细胞可能不具有与全血相同的相对浓度。这在白细胞计数正常的个体中可能相对无关紧要。在白细胞减少症患者中,特定亚群的选择性丢失可能影响测定的准确性。
•了解抗原正常表达模式及其与其他相关抗原的关系是进行充分分析的关键(9-11)。
•健康状态异常并不总是由某些白细胞群的异常百分比表示。一个健康状况不正常的人可能与一个健康的人有相同的白细胞百分比。因此,建议将检测结果与其他临床和诊断数据结合使用。
预期值
每个实验室都应该建立自己的NK细胞计数正常参考值范围(CD3-CD56+),因为这些值可能受到年龄、性别和种族的影响(12,13)。根据参考文献,仅以信息为特征,CF获得的健康个体中NK细胞占淋巴细胞总数的比例约为6-29%(12)。
质量控制?
•需要验证移液管精度和细胞仪校准,以获得最佳结果。
•在多色面板中,荧光染料发出的波长可以显示一定的光谱重叠,必须通过电子补偿来纠正。通过对健康个体的细胞进行分析,可以确定最佳补偿水平,这些细胞使用与适当荧光素偶联的相互排斥的单克隆抗体染色。为了评价抗体的非特异性结合,可以制备一种合适的同型对照管。
•本产品按照ISO 13485:2012标准的生产和质量体系标准制造。
分析效率
重现性和可重复性:
比较了10个不同样品用2种不同批次相同试剂染色的结果。对同一样本的每对数据进行分析,得到平均荧光强度(MFI)和个体标准差(SD)。将SDs结合起来,可以得到每个试剂的混合SD和%CV,从而对样品内重复性进行评估。CYT-56PE单抗分析结果如下图所示:
特异性:
CD56抗原存在于人外周血NK细胞和CD3+CD4+、CD3+CD8+ T细胞亚群中。正常的B淋巴细胞和粒细胞不表达CD56表面抗原。为了评估该试剂与其他细胞群的交叉反应性,我们对来自健康献血者的10份血液样本进行了一项研究,并对其进行了充分的同型对照染色和单抗研究。测定单核细胞、血小板、红细胞、淋巴细胞、单核细胞和粒细胞染色率。CYT-56PE单抗分析结果如下图所示:
REFERENCES
1. Menéndez P, et al. Comparison between a lyse-and-then-wash method and a lyse-non-wash technique for the enumeration of CD34+ hematopoietic progenitor cells. Cytometry (Comm. Clin. Cytometry) 34: 264-271 (1998).
2. Gratama JW, Menéndez P, Kraan J, Orfao A. Loss of CD34+ hematopoietic progenitor cells due to washing can be reduced by the use of fixative-free erytrocyte lysing reagents. J Immunol. Methods 239:13-23 (2000).
3. Orfao A, González de Buitrago JM La citometría de flujo en el laboratorio clínico. Sociedad española de bioquímica clínica y patología Molecular 1995.
4. Okuno SH, Tefferi A, Hanson C, Katzmann JA, Li CY, Witzig TE. Spectrum of diseases associated with increased proportions or absolute numbers of peripheral blood natural killer cells. BrJ Haematol. 93: 810-812 (1996).
5. Protection of Laboratory Workers from occupationally acquired infections. Second edition; approved guideline (2001). Villanova PA: National Committee for Clinical Laboratory Standards; Document M29-A2.
6. Procedures for the collection of diagnostic blood specimens by venipuncture- approved standard; Fifth edition (2003). Wayne PA: National Committee for Clinical Laboratory Standards; Document H3-A5.
7. Clinical applications of flow cytometry: Quality assurance and immunophenotyping of lymphocytes; approved guideline (1998). Wayne PA: National Committee for Clinical Laboratory Standards; Document H42-A.
8. Cytognos. 2011. Infinicyt™ Flow Cytometry Software. Version 1.7. Cytognos S.L. Salamanca, Spain. http://www.infinicyt.com
9. Rothe G, Schmitz G. Consensus protocol for the flow Cytometric immunophenotyping of hematopoietic malignancies. Leukemia. 10: 877-895 (1996)
10. Ocqueteau M, Orfao A, Almeida J et al. Immunophenotypic characterization of plasma cells from monoclonal gammopathy of undetermined significance patients. Implications for the differential diagnosis between MGUS and multiple mieloma. Am J Pathol. 152: 1655-1665 (1998)
11. Lanier LL, Le AM, Civin CI, Loken MR, Phillips JH. The relationship of CD16 (Leu-11) and Leu-19 (NKH-1) antigen expression on human peripheral blood NK cells and cytotoxic T Lymphocytes. J Immunol. 136: 4480-4486 (1986)
12. Reichert et al. Lymphocyte subset reference ranges in adult Caucasians. Clin Immunol Immunopathol 60:190-208 (1991)
13. Prince HK et al. Influence of racial background on the distribution of T-cell subsets and Leu-11 positive lymphocytes in healthy blood donors. Diagn Immunol. 3: 33-39 (1985)
 
 
公司简介

普瑞麦迪(北京)实验室技术有限公司坐落于中关村科技园丰台园区,是致力于生命科学实验室整体解决方案的国家高新技术企业。公司秉承“持续创新、以人为本、服务至上、合作共赢”的理念,以“引进全球创新技术、创新产品、助力中国生命科学飞速发展”为使命;聚集了一批行业内的专业精英,包括杰出的留学归国研发和管理人员及国内优秀人才等一起构成公司的精英团队。公司集自主研发和引进国际顶尖技术产品为一体,主营产品涵盖生命科学、医学、环境生物学及化学等领域的高端仪器及试剂。


售后服务
普瑞麦迪公司是专业的流式细胞仪代理和服务商,产品涵盖细胞成像系统、流式细胞仪、分子生物学产品、常规实验室设备及试剂等众多产品。公司有完善的售前、售后、实验室技术团队,有充足的仪器配件、DEMO样机及优秀的技术人员,“服务为本”是普瑞麦迪公司一贯的工作理念。
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