特别提示:包括法医样本核酸提取试剂盒(磁珠法)在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:法医样本核酸提取试剂盒(磁珠法)
产品货号:ML020
产品规格:64T
【应用】
适用于法医样本如血斑、烟蒂、口腔拭子、毛发、精斑中痕量基因组DNA的提取,可配合各类磁棒式核酸提取仪(HR003)或自动化/半自动化工作站。
【特点】
1.耗时少:法医样本DNA提取周期在60分钟左右
2.操作简便:提取过程无需离心
3.无毒无害:试剂中不含有氯fǎng,酚等有毒物质;无需液氮研磨
4.效果稳定:OD260/OD280稳定在1.7-2.0之间,产量较其他方法高
5.自动化:可配合国内外各类磁棒式核酸提取仪或核酸提取工作站
【方法】
裂解--结合--洗涤--洗脱(详情请见产品附带说明书)
根据您的关注的
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名称:柱式小量血液基因组DNA提取试剂盒(0.1~20ml)
货号:WE0175
规格:50次|200次
本试剂盒适用于从新鲜或冷冻的全血(用柠檬酸盐、EDTA或肝素等抗凝剂处理过的血液样品)、血浆、血清、血沉棕黄层、淋巴细胞、无细胞体液等样本中提取总DNA,包括基因组DNA,线粒体DNA及病毒DNA。本品可以处理0.1-1ml的全血,最高得率可达30μg,可纯化获得大小为100 bp到50 kb的DNA,纯化的DNA产量高、质量好,最大限度去除蛋白、色素、脂类及其他抑制性杂质污染,可直接用于PCR、荧光定量PCR、酶切和Southern Blot等实验。
试剂盒组成:
组份 |
50次 |
200次 |
Buffer RCL |
125ml |
2×260ml |
Buffer GR |
15ml |
50ml |
Buffer GL |
15ml |
50ml |
Buffer GW1(浓缩液) |
13ml |
52ml |
Buffer GW2(浓缩液) |
15ml |
50ml |
Buffer GE |
15ml |
60ml |
蛋白酶K |
12.5 mg |
50 mg |
蛋白酶K 储存液 |
1.25ml |
5ml |
吸附柱 DM及收集管 |
50套 |
200套 |
产品特点
1、纯度高:提取的基因组DNA可直接用于下游PCR、荧光定量PCR、酶切等各种实验。
2、提取量大:可从0.1-1.0ml的全血中提取基因组DNA。
3、兼容性强:适用于处理各种抗凝血液和细胞样本。
自备试剂:无水乙醇
实验前准备及重要注意事项:
1、向蛋白酶K 中加入蛋白酶K 储存液使其溶解,-20℃保存。配制好的蛋白酶K 勿长时间室温放置,避免反复冻融,以免影响其活性。
2、样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。
3、本试剂盒最多可以提取0.1-1ml全血样品或1×107个白细胞。
4、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。
5、使用前请检查Buffer GL是否出现结晶或者沉淀,如有结晶或者沉淀,请将Buffer GL于56℃水浴孵育重新溶解。
6、试剂盒中的Buffer RCL浑浊后不能继续使用。
操作步骤:
1、样品处理:
1.1、提取200 ul血液样品时,向离心管(自备)中加入样本后,可直接进行下一步实验。
1.2、当血液样本量小于200μl时,加入Buffer GR补足至200μl,再进行下一步实验。
1.3、当血液样本量超过200μl时,加入1~2.5倍体积的Buffer RCL,轻轻涡旋或颠倒混匀,12000rpm(~~13400×g)离心1分钟,小心吸弃上清液,如果沉淀中还有红色,可以重复以上步骤一次。然后向沉淀中加入200μl Buffer GR,震荡至彻底混匀,再进行下一步实验。
1.4、如果处理血液样本为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的抗凝血,其红细胞为有核细胞,血液样本量为5-20μl,可加入Buffer GR,补足至200μl后进行后续实验。
注意:如果下游试验对RNA敏感,可加入4μl RNase A(100mg/ml)溶液,震荡15秒,室温放置5分钟。RNase A本试剂盒并未提供,如需要可单独向本公司订购,货号:WE0225S。
2、向以上溶液中加入20μl 蛋白酶K ,混匀。
3、加入200μl Buffer GL,震荡至彻底混匀。
注意:不要将蛋白酶K 和Buffer GL进行预混。
4、56℃孵育10分钟,其间颠倒混匀数次。
注意:孵育10分钟DNA的产量已经达到最大,继续延长孵育时间对DNA产量和纯度没有影响。
5、加入200μl无水乙醇,颠倒混匀数次。短暂离心,使管壁和壁盖上的液体集中到管底。
6、将步骤5所得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱DM中,若一次不能加完溶液,可分多次转入。12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
7、向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前检查是否加入无水乙醇), 12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
注意:如果提取样品是小鼠或猴子等血红素难以除去的种属的血液基因组,建议重复步骤7。
8、向吸附柱中加入500μl Buffer GW2(使用前检查是否加入无水乙醇),12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
注意:如需进一步提高DNA纯度,可重复步骤8。
9、12000rpm离心2分钟,倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟,以彻底晾干。
注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR 等)。
10、将吸附柱置于一个新的离心管(自备)中,向吸附柱的中间部位悬空加入50-200μl Buffer GE或灭菌水,室温放置2-5分钟,12000rpm离心1分钟,收集DNA溶液,-20℃保存DNA。
注意:
1)如果下游实验对pH值或EDTA敏感,可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响,若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围),pH值低于7.0时洗脱效率不高。
2)如果要提高DNA的终浓度,可以将所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上,室温放置2-5分钟,12000rpm离心1 分钟。
3)因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响,如需长期保存,推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。
储存条件:室温(15~30℃)。

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