特别提示：包括蛋白标准溶液BSA在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：蛋白标准溶液BSA
英文名称：Protein Standard Solution(BSA)
产品货号：WE0274
产品规格：5ml



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名称：细胞核蛋白提取试剂盒
货号：SNM415
规格：50T

名称：Western封闭液III(磷酸化抗体专用)
货号：RFT088
规格：100ml
本产品以非哺乳动物源的蛋白为基础，不含有磷酸化蛋白，可快速高效地封闭膜上多余的结合部位，减少非特异结合情况的产生，降低背景，适用于各种转印膜的封闭，操作方便快捷。另外，本产品特别添加了蛋白稳定剂，可保证每次实验封闭效果稳定可靠。

使用方法：
1、本产品无需稀释，开盖即用。
2、目的蛋白转移完毕后，将印迹膜放入容器中，加入适量Western封闭液III(以完全覆盖印迹膜为宜) 。
3、室温孵育30分钟至2小时，必要时可4℃孵育过夜。
4、封闭结束后弃去封闭液，进行Western Blot后续操作。

注意事项：
1、由于奶粉和BSA中含有磷酸化蛋白，基于两者做成的Western封闭液I和II不适于磷酸化抗体的封闭。
2、该封闭液中含有生物素，不能用于streptavidin/biotin系统。
3、该封闭剂是也能用于ECL/HRP以及AP/BCIP底物检测系统。

储存条件：2～8℃，有效期6个月。

名称：免疫染色洗涤液
货号：KFS011
规格：250ml
免疫染色洗涤液可以用于免疫染色时一抗或二抗孵育后的洗涤。适当的洗涤可以降低背景，增强信噪比。

本免疫染色洗涤液中含有适量Triton X-100，可以通透细胞膜。经本免疫染色洗涤液处理的细胞样品可以检测细胞内的目的蛋白，包括细胞浆内和细胞核内的目的蛋白。

按照每组样品洗涤需要5-10 毫升免疫染色洗涤液计算，一个包装的免疫染色洗涤液可以洗涤25-50 次。

本免疫染色洗涤液经过滤除菌处理，使用过程中应尽量避免细菌污染。一旦启用后建议在2周内用完。

储存：4℃保存，一年有效。

名称：小牛肠碱性磷酸酶
货号：SY0388
规格：1000U
本品为小牛肠来源的碱性磷酸酶，可以降解几乎所有磷酸单酯，但是该酶不能水解磷酸二酯或磷酸三酯。Alkaline Phosphatase，中文名碱性磷酸酶，可将DNA、RNA的5’端磷酸基团去除，常用于阻止载体的自连作用：在分子克隆实验中，DNA连接酶催化DNA连接时需要有磷酸基团的存在，载体在经酶切后会在切点端保留一个磷酸基团。而载体经碱性磷酸酶去磷酸化后因5’ 端无磷酸基团，因而不可以和自身3’ 端连接。因此连接反应中载体本身会优先发生的连接反应被阻止，提高了目的片段插入率。另外，碱性磷酸酶还可制备用于5’端标记的DNA模板，以及用于该酶蛋白的脱磷酸作用等。

来源：携带小牛肠碱性磷酸酶表达质粒的酵母
质量控制（Quality Control）：无核酸外切酶、核酸内切酶、核糖核酸酶污染
热灭活（Thermal Inactivation）：在螯合剂存在下，65℃加热30min，99%活性不可逆丧失；使用苯酚，可使酶完全失活。
储存液条件（Storage conditions）：10 mM Tris-HCl (pH8.0), 1 mM MgCl2, 50mM KCl, 0.1 mM ZnCl2, 50% glycerol.
活性定义：在pH9.8, 37℃条件下，以对硝基苯酚磷酸盐(p-nitrophenylphosphate)为底物，1分钟生成1µmol硝基酚(p-nitrophenol)所用的碱性磷酸酶量定义为1个活力单位。
最佳pH（Optimal pH）：该酶在底物浓度高的情况下其最佳反应pH为10，在底物浓度低时，最佳pH为8，此时该酶活性较高浓度底物时稍低。
优化体系（Optimal Buffer）：AP Buffer (500 mM Tris-HCl, pH9.0; 10 mM MgCl2)
储存条件：-20℃

使用方法:
1 DNA去磷酸化
① 在1.5ml离心管中加入下列试剂：
无菌ddH2O————Up to 50µl
DNA 片段*————1-20pmol
Alkaline Phosphatase————1-2µl
10×AP buffer————5µl
【*】：单链DNA或含5’端突出末端的DNA推荐低温下孵育，平末端DNA或含3’突出末端的DNA建议在较高温度下孵育。
② 混匀上述试剂，于37℃或50℃孵育30min。或者37℃孵育15min后，再于50℃孵育15min。

2 酚lǜ仿法抽提DNA
① 苯酚/lǜ仿/异戊醇（25:24:1）抽提2次。
【注】：推荐在酚提取前将其在含5 mM EDTA, 0.5% SDS ,50 μg/ml Proteinase K的溶液中56℃孵育30min以彻底灭活碱性磷酸酶。在酚提取前于75℃孵育10min，灭活效果更佳。
② lǜ仿/异戊醇（24:1）抽提。

3 乙醇沉淀DNA
① 加入2.5µl 3M NaCl(终浓度150mM).
② 加入125µl（2.5倍体积）预冷乙醇，混匀后于-20℃放置30-60min，沉淀DNA。

4 溶解DNA
离心，彻底去除乙醇后，将DNA溶于适量去离子水（＜20µl）。