DNA Shuffling试剂盒
基本信息
产品名称：
DNA Shuffling试剂盒
英文名称：
DNA Shuffling Kit
国产/进口：
国产
产地/品牌：
百奥莱博
型号：
BTN131178
参考报价：
销售商：
总点击数：
392
更新日期：
2025-05-14
产品类别：
性能参数
特别提示：包括DNA Shuffling试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：DNA Shuffling试剂盒
英文名称：DNA Shuffling Kit
产品货号：BTN131178
产品规格：10次
DNA Shuffling即DNA分子的体外同源重组，它是一种分子水平上的定向进化(directed evolution)技术，它以一个或多个基因为起始材料，通过先随机断裂成小片段，再进行互为模板和引物的PCR(无外加引物)，最后再进行常规PCR(外加引物)等处理，最后得到含有大量DNA重组突变的PCR产物。其原理示意图如下：
产品特点：
1.即开即用，用户只需要提供样品DNA模板，无需单独准备各成分。
2.操作手册经过优化，1-2天即可完成，节省大量优化时间。
3.本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。
试剂盒组成：
| 成分 | 规格 |
| PCR Mix 3.0，2× | 1.5mL |
| DNase I溶液(1U/μL) | 10μl |
| 溶液A，10× | 60μl |
| 溶液B，10× | 60μl |
| 超纯水 | 1mL |
| 说明书 | 1份 |
储存条件：低温运输，-20℃保存，保存期限一年。
使用方法：
1.待突变基因片段的制备：待突变基因片段可以用含此基因的质粒为模板、用PCR法或酶切法制备。制备时需保证含此基因(或此基因的一部分)的DNA片段总长度不要超过1kb，同时比DNA shuffling终产物(第二轮PCR产物)长200-400bp。每次DNA Shuffling实验至少需要2μg起始DNA片段(如果含几个基因片段，则彼此的比例为1:1)，并且必须通过胶回收的方法回收，以便彻底去除残留的质粒模板、引物和非特异扩增产物等。最后需用分光光度法准确定量。
2.提前准备37℃和75℃水浴，同时新鲜配制0.1U/μL的DNase工作液放冰上待用(必须在用时才配制，方法是将1μl 本试剂盒提供的1U/μL的DNase I溶液和1μl溶液A和8μl超纯水混合)。此溶液需在24小时内使用。
3.在一个离心管中，按顺序加入下列成分：
| 成分 | 用量 |
| 待突变基因片段(第1步制备) | 2μg |
| 溶液A | 5μl |
| 溶液B | 5μL |
| DNase I工作液(第2步制备) | 2μL |
| 超纯水 | 36μL |
4.充分轻柔吹打混匀后37℃水浴8分钟，然后立即放75℃水浴处理10分钟以灭活DNase I。
5.在2-3%琼脂糖凝胶上电泳，用常规的胶回收法回收25-150bp范围的所有片段待用。注意：一定要加合适的DNA marker以便确定片段范围，最好使用本公司生产的绿如蓝核酸染料(可见光型)作为电泳染料以避免用UV照射DNA，否则UV使DNA发生的交联将极大降低后续扩增效果。
6.分光光度法精确测定回收片段的浓度。
7.在PCR管中按顺序加入0.5μg上步回收得到的回收片段、50μl 2×PCR Mix、加超纯水到100μl。
8.按下面的PCR反应参数进行第一轮无引物PCR：
| 过程 | 温度 | 时间 |
| PCR前变性 | 94℃ | 150s |
| PCR反应(40循环) | 94℃ | 30s |
| 47.5℃ | 45s | |
| 72℃ | 10s，每次循环后增加5s | |
| PCR后延伸 | 72℃ | 10min |
9.取5-10μl进行电泳检测，然后进行PCR回收，得到第一轮PCR产物。
10.将回收的第一轮PCR产物1μl原液作为模板设置3管第二轮PCR反应。
| 成分 | 用量 |
| 回收的第一轮PCR产物 | 1μL |
| PCR Mix 3.0，2× | 50μL |
| 自备DNA Shuffling引物 | 各1μM |
| 超纯水 | 加水到100μL |
11.按下列PCR参数进行第二轮PCR。
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 活化 | 94℃ | 150s |
| PCR反应(25次循环) | 94℃ | 30s |
| 47.5℃ | 45s | |
| 72℃ | 60s，每次循环后增加5s | |
| PCR后延伸 | 72℃ | 10min |
12.电泳检测，回收预期大小的PCR产物，用于后续的构建克隆文库实验(略)。
疑难解答：
Q：易错PCR和DNA Shuffling有何区别？
A：前者引入的是点突变，后者引入的是重组突变。示意图如下：
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3. 提高LA-PCR的扩增效率。
4. 提高Taq DNA聚合酶的稳定性。
储存条件：低温运输，4℃保存，有效期一年。
使用方法：将本产品加入PCR反应体系中，使其终浓度在1.0-1.7M之间即可。其他按常规操作进行即可。
名称：DNA Shuffling试剂盒
货号：BTN131178
规格：10次
DNA Shuffling即DNA分子的体外同源重组，它是一种分子水平上的定向进化(directed evolution)技术，它以一个或多个基因为起始材料，通过先随机断裂成小片段，再进行互为模板和引物的PCR(无外加引物)，最后再进行常规PCR(外加引物)等处理，最后得到含有大量DNA重组突变的PCR产物。其原理示意图如下：
产品特点：
1.即开即用，用户只需要提供样品DNA模板，无需单独准备各成分。
2.操作手册经过优化，1-2天即可完成，节省大量优化时间。
3.本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。
试剂盒组成：
| 成分 | 规格 |
| PCR Mix 3.0，2× | 1.5mL |
| DNase I溶液(1U/μL) | 10μl |
| 溶液A，10× | 60μl |
| 溶液B，10× | 60μl |
| 超纯水 | 1mL |
| 说明书 | 1份 |
储存条件：低温运输，-20℃保存，保存期限一年。
使用方法：
1.待突变基因片段的制备：待突变基因片段可以用含此基因的质粒为模板、用PCR法或酶切法制备。制备时需保证含此基因(或此基因的一部分)的DNA片段总长度不要超过1kb，同时比DNA shuffling终产物(第二轮PCR产物)长200-400bp。每次DNA Shuffling实验至少需要2μg起始DNA片段(如果含几个基因片段，则彼此的比例为1:1)，并且必须通过胶回收的方法回收，以便彻底去除残留的质粒模板、引物和非特异扩增产物等。最后需用分光光度法准确定量。
2.提前准备37℃和75℃水浴，同时新鲜配制0.1U/μL的DNase工作液放冰上待用(必须在用时才配制，方法是将1μl 本试剂盒提供的1U/μL的DNase I溶液和1μl溶液A和8μl超纯水混合)。此溶液需在24小时内使用。
3.在一个离心管中，按顺序加入下列成分：
| 成分 | 用量 |
| 待突变基因片段(第1步制备) | 2μg |
| 溶液A | 5μl |
| 溶液B | 5μL |
| DNase I工作液(第2步制备) | 2μL |
| 超纯水 | 36μL |
4.充分轻柔吹打混匀后37℃水浴8分钟，然后立即放75℃水浴处理10分钟以灭活DNase I。
5.在2-3%琼脂糖凝胶上电泳，用常规的胶回收法回收25-150bp范围的所有片段待用。注意：一定要加合适的DNA marker以便确定片段范围，最好使用本公司生产的绿如蓝核酸染料(可见光型)作为电泳染料以避免用UV照射DNA，否则UV使DNA发生的交联将极大降低后续扩增效果。
6.分光光度法精确测定回收片段的浓度。
7.在PCR管中按顺序加入0.5μg上步回收得到的回收片段、50μl 2×PCR Mix、加超纯水到100μl。
8.按下面的PCR反应参数进行第一轮无引物PCR：
| 过程 | 温度 | 时间 |
| PCR前变性 | 94℃ | 150s |
| PCR反应(40循环) | 94℃ | 30s |
| 47.5℃ | 45s | |
| 72℃ | 10s，每次循环后增加5s | |
| PCR后延伸 | 72℃ | 10min |
9.取5-10μl进行电泳检测，然后进行PCR回收，得到第一轮PCR产物。
10.将回收的第一轮PCR产物1μl原液作为模板设置3管第二轮PCR反应。
| 成分 | 用量 |
| 回收的第一轮PCR产物 | 1μL |
| PCR Mix 3.0，2× | 50μL |
| 自备DNA Shuffling引物 | 各1μM |
| 超纯水 | 加水到100μL |
11.按下列PCR参数进行第二轮PCR。
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 活化 | 94℃ | 150s |
| PCR反应(25次循环) | 94℃ | 30s |
| 47.5℃ | 45s | |
| 72℃ | 60s，每次循环后增加5s | |
| PCR后延伸 | 72℃ | 10min |
12.电泳检测，回收预期大小的PCR产物，用于后续的构建克隆文库实验(略)。
疑难解答：
Q：易错PCR和DNA Shuffling有何区别？
A：前者引入的是点突变，后者引入的是重组突变。示意图如下：
公司简介
北京百奥莱博科技有限公司一家专注于生命科学研究领域的生物技术公司，坚持“质量至上，服务为本，全心全意助力生命科学”的理念，为广大用于提供稳定、可靠、专业的产品和服务支持，产品线包括分子生物学，细胞生物学，免疫检测，抗体，重组蛋白，血液制品等系列。“忙忙碌碌的平凡，铸就事业的不凡”。让我们携起手来，共同创造生命科学的蓬勃发展。
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