特别提示：包括溴化乙锭清除剂(EB清除剂)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：溴化乙锭清除剂(EB清除剂)
英文名称：EB scavenger
产品货号：BTN3092
产品规格：100次

本品通过与溴化乙锭(EB)分子中的氨基反应和断开EB分子中的含氮杂环而有效破坏EB的分子结构，达到去除EB污染的目的，适用于清除溶液和物体表面污染的EB。

产品特点：
1. 能消除EB的荧光，并使其致突变性降低99%以上。
2.适用范围广泛，可用于含EB污染的水、氯化铯溶液、电泳缓冲液(TAE、TBE、MOPS等)、有机溶剂(乙醇、异丙醇、异戊醇、异丁醇等)和受污染的多种物体表面(玻璃、不锈钢、塑料、地板、紫外滤光片等)。
3. 使用简单、方便、迅速。
4. 无色或浅黄色透明液体、无毒但有腐蚀性和刺激性气味。
5. 本品暴露于空气中的时间不宜过长，使用完毕请立即密封、保存于避光、通风处。

产品组成：

成分	规格
溶液A	100ml
溶液B	200ml
说明书	1份

储存条件：室温保存及运输，有效期一年。

使用方法：

一：清除水溶性溶液(如水、Tris、MOPS、氯化铯等)中的EB
1. 用水将溶液稀释使其EB浓度低于0.5mg/mL(如果EB浓度已经低于1mg/mL则可以直接进行下一步操作)。
2. 按溶液A:溶液B:被污染溶液=1:2:100的比例将溶液A和溶液B先后加入到溶液中(由于溶液混合初期会产生少量有害气体，所以整个操作必须在化学通风橱中小心操作)。
3. 搅拌五分钟，室温静置20小时。
4. 用自备的饱和碳酸氢钠溶液中和使其pH变为中性。
5. 检查清除程度。
6. 弃废液。
二：清除氯化铯饱和的异丙醇中的EB
1. 用水将氯化铯饱和的异丙醇溶液稀释使其EB浓度低于1mg/mL(如果EB浓度已经低于1mg/mL则可以直接进行下一步操作)。
2. 按氯化铯饱和的异丙醇溶液:EB Scavenger工作液=1:4的比例加入新鲜配制的EB Scavenger工作液(配制方法见五)，室温搅拌20小时。
3. 用自备的饱和碳酸氢钠溶液中和，使溶液pH为中性。
4. 倒弃废液。
三：清除异戊醇和丁醇中的EB
1. 用水将溶液稀释使其EB浓度低于1mg/mL(如果EB浓度已经低于1mg/mL则可以直接进行下一步操作)。
2. 按溶液:EB Scavenger工作液=1:4的比例加入新鲜配制的EB Scavenger工作液(配制方法见五)，溶液分成两相，室温搅拌72小时。
3. 2克活性炭/100mL混合液的比例加入自备活性炭，再搅拌30分钟。
4. 过滤去活性炭。
5. 用饱和碳酸氢钠中和液体混合液体使pH变为中性。
6. 倒弃废液。
四：清除物体表面的EB
1. 用浸泡过新鲜EB Scavenger工作液(配制方法见五)的纸巾擦洗物体表面污染处5次，每次更换新的纸巾。由于工作液pH为1.8，如果物体表面不耐酸(如玻璃、不锈钢、地板等)，直接进入第二步操作。但一般紫外透射滤光片可以直接用工作液处理。
2. 再用浸泡过水的纸巾擦洗物体表面污染处5次，每次更换新的纸巾。
3. 用紫外灯检查清洁效果，如果看不见EB荧光,可以进行下一步操作。如果还有可见的EB荧光,则重复第二步。(对不便于直接用紫外灯照射的污染处，可以将所用的纸巾中的溶液挤出，放置在紫外灯下比较荧光的强弱，一般荧光会逐渐变弱)。
4. 风干清洁过的物体表面。
5. 将用过的纸巾浸泡在EB Scavenger工作液中，静置至少一小时降解EB。
6. 丢弃纸巾。
7. 用自备的饱和碳酸氢钠溶液中和工作液,使其pH为中性。
8. 倒弃废液。
五：新鲜EB Scavenger工作液的配制
1. 估计工作液的用量。
2. 按溶液A:溶液B:水=1:2:30的比例在化学通风橱中先后将水，溶液A和溶液B加入到大小合适的容器中室温搅拌10分钟混匀(由于配制时会产生少量有害气体，所以整个操作必须在化学通风橱中小心操作)。
3. 立即按上面的各种情况使用新鲜配制的工作液。使用者需戴手套，溅到皮肤上后立即用自来水冲洗。

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名称：一站式DNA非变性PAGE电泳套装
货号：BTN100205
规格：30次
本品就是专门用于非变性PAGE的试剂。非变性PAGE电泳是研究SSCP-PCR(single-strand conformation polymorphism-PCR、单链PCR片段构象多态性)和凝胶滞阻(Gel Shift)的重要研究手段，因为在非变性PAGE中，DNA的迁移率除跟长短相关外，还跟其构象和结合的蛋白质相关。

产品特点：
1.一站式，用户只需要准备水和样品，十分方便。
2. 安全，免去了实验人员接触粉末状的剧毒物品。
3. 灵活，高浓度的溶液可用于配制各种浓度的PAGE胶，分开提供的和甲叉双可用于配制各种交联度的PAGE胶。
4. PAGE电泳后可直接用于银染等后续试验。

产品组成：

成分	规格	保存
	60g	室温
甲叉双	2g	室温
TEMED	1.5ml	4℃，避光
过硫酸铵(干粉)	1g	室温
非变性PAGE上样液，2×	1ml	4℃
10×TBE(BTN90313)	250ml	室温
说明书	1份

储存条件：常温运输，保存条件见上表，有效期一年。

使用方法：
用于SSCP-PCR分析的非变性PAGE电泳(其他应用请相应修改参数)

一、PAGE浓度的选择：最好使用浓度为5-12%的胶，因为SSCP-PCR的扩增长度一般在150-200bp之间，而5%的PAGE的有效分辨范围为80-500bp、8%的PAGE的有效分辨范围为60-400bp、12%的PAGE的有效分辨范围为40-200bp。

二、PAGE交联度的选择：交联度越低，孔径越大，对DNA分子构象的变化越灵敏，SSCP分辨率越高，但过低则胶太软，不好进行电泳后的后续操作，所以一般选择1-2%的交联度(即：甲叉双在49:1到48:2之间)。

三、体积的选择：SSCP-PCR检测需要长约30-40cm的测序胶板，可以结合梳子的厚度，计算胶的体积。
操作：
1. 配制PAGE胶(这是配制100mL胶的用量，配制更大体积的胶则需以此用量为基础按比例增加)
A：新鲜配制10%的APS(过硫酸铵)：按每0.1克过硫酸铵干粉加1mL超纯水的比例将水加到装有硫酸铵干粉的1.5mL EP管中，摇晃到粉末全部溶解。配制好的10%的APS溶液可以在4℃存放一周。
B：新鲜配制适当交联度29:1的30%的-甲叉双溶液(AB溶液，下同)：在本产品提供的装有60 g干粉的塑料瓶中加入146mL自备的去离子水和全部的甲叉双，充分摇晃直到溶解(约需10-20分钟)，即得到30%的AB(29:1)溶液。此溶液最好在一个月内用完，必须4℃避光保存。
C：配SSCP PAGE胶：在一个250mL的三角瓶中，先按下表的用量加入去离子水、30% AB溶液溶液和10×TBE缓冲液。单体溶液具有神经毒性，一定要戴手套操作。

PAGE胶浓度	各成分用量(单位：ml)			总体积(ml)
	去离子水	30%AB溶液	10×TBE缓冲液
5%	73.4	16.6	10.0	100
6%	70.0	20.0	10.0	100
7%	66.7	23.3	10.0	100
8%	63.3	26.7	10.0	100
9%	60.0	30.0	10.0	100
10%	56.7	33.3	10.0	100
11%	53.3	36.7	10.0	100
12%	50.0	40.0	10.0	100

注：有大量文献报道PAGE胶中加入5%-10%的甘油能提高某些位点的分辨率。如果选择加入10%的甘油，则减少去离子水的用量10mL，同时加入10mL甘油。
D：摇晃混匀。最好能抽真空10-15分钟以去除溶液中的氧气(氧气能抑制聚合反应)，无条件也可以不脱氧。
E：加入500μL 10%APS和100μL TEMED，迅速摇匀后倒胶。
F:在胶的液面距离达到顶部时停止灌胶，插入梳子。
G:室温聚合30-60分钟(低温抑制聚合反应)。
H: 拔出梳子，用1×TEB液冲洗加样孔。
I: 放4℃冰箱预冷30分钟-12小时。为了防止胶收缩，最好顶部加少量1×TBE缓冲液。预冷的胶有利于保持单链DNA的构型。
2. 将预冷的凝胶板固定在电泳装置上，往上槽和下槽中加入足够1×TEB电泳液。
3. 取3-5μl SSCP-PCR样品，加入等体积2×非变性PAGE上样液，85℃处理5分钟后冰浴。用前短暂离心后取2μl上样。
4.连接电源线，打开电源开关。如果PAGE中不含甘油，则使用25W的功率，电泳5-7小时(对3—40cm长的PAGE胶而言)。如果使用含甘油的PAGE，则使用8W的功率，电泳16-18小时。由于温度变化过大会改变DNA构型，所以电泳时最好能保持恒温。对不含甘油的PAGE，最好恒温在4℃、对含甘油的PAGE，最好恒温在25℃。
5. 终止电泳，取出凝胶进行后续的处理(如银染)。

疑难解答：
一、为何SSCP-PCR带型有复合条带？
原因之一：可能是残留的PCR引物跟单链的DNA结合形成迁移率不同的条带。解决方法是稀释PCR或电泳前将PCR产物进行纯化。
原因之二：可能是PCR产物用量过高，彼此复性。解决办法是将PCR产物稀释后4-8倍后使用。
二、如何提高电泳分辨率？
可以在配胶时加入甘油(终浓度为5%-10%)，因为甘油是弱变性剂，能部分展开DNA折叠结构，增加表面积，增加电泳时位移差异。但加入甘油后粘性变大，电泳速度变慢，因此只适合室温电泳使用，不要4℃电泳。如果条件允许，最好同时做加甘油和不加甘油的电泳实验。

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货号	名称	规格
BTN100816	碱性胶电泳液	250mL
BTN81104	超快核酸银染试剂盒	1000mL
BTN3180	溴化乙锭溶液	1.5mL
RFT006	250bp DNA ladder(250～5000bp)	100T(2×250μl)
RFT011	15kb DNA ladder(250～15000bp)	100T(2×250μl)
RFT016	5kb plus DNA ladder(100～5000bp)	100T(2×250μl)