特别提示：包括Pfu DNA聚合酶(Pfu酶)(含buffer)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：Pfu DNA聚合酶(Pfu酶)(含buffer)
英文名称：Pfu DNA Polymerase
产品货号：YT372
产品规格：200U|1000U

pfu DNA 聚合酶简称Pfu酶，是最常用的高保真DNA聚合酶之一。Pfu DNA Polymerase是一种来源于嗜热菌Pyrococcus furiosus的高度热稳定的DNA聚合酶。Pfu酶的分子量为90kDa。Pfu酶可以催化5’至3’方向的依赖于DNA模板的脱氧核苷酸的聚合。和Taq酶不同，Pfu酶有3’至5’的外切酶活性(proofreading activity)。另外，Pfu酶有5’至3’外切酶活性，但Pfu酶没有反转录酶活性。

由于Pfu酶有3’至5’的外切酶活性，因此在PCR扩增过程中出错的几率大大降低，出错率为2.6×10e-6。Pfu的出错率不仅远远低于Taq酶，也低于一些其它的高保真DNA聚合酶例如Vent、DeepVent、Pwo、Tli等，因此Pfu酶常作为首选的高性价比的高保真DNA聚合酶。

来源：本Pfu DNA Polymerase为recombinant Pfu DNA Polymerase，通过大肠杆菌表达纯化获得，和纯化获得的天然Pfu DNA Polymerase在各方面的性质相同。

用途：高保真PCR (high fidelity PCR)、点突变、双平端PCR克隆等。
1）Pfu酶扩增出来的DNA片断为双平端，可以用于双平端克隆，但不能用于常规的T载体克隆。
2）dUTP和dITP或含有dUTP和dITP的引物不能用于Pfu酶介导的PCR扩增反应。

活性定义：One unit of the enzyme catalyzes the incorporation of 10 nmol of deoxyribonucleotides into a
polynucleotide fraction (adsorbed on DE-81) in 30 min at 72℃. Enzyme activity is assayed in the following mixture: 20 mM Tris-HCl (pH 8.8 at 25℃), 2 mM MgSO4, 10 mM (NH4)2SO4, 10 mM KCl, 0.1% (v/v) Triton X-100, 0.1 mg/ml BSA, 0.75 mM activated calf thymus DNA, 0.2 mM of each dNTP, 0.4 MBq/ml [3H]-dTTP.

纯度：不含DNA内切酶、外切酶和磷酸酯酶，不含RNA酶，满足常规PCR反应要求。

酶储存溶液：20 mM Tris-HCl (pH 8.2), 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 100 mM KCl, 0.1% (v/v) Nonidet P40, 0.1% (v/v) Tween 20 and 50% (v/v) glycerol。

10×Pfu Buffer (with Mg2+)：200 mM Tris-HCl (pH 8.8 at 25℃), 100 mM (NH4)2SO4, 20 mM MgSO4, 100 mM KCl,1% (v/v) Triton X-100, 1 mg/ml BSA。

失活或抑制：酚氯fǎng抽提可以使Pfu酶失活。

储存条件：-20℃。

注意事项：
1）由于PCR反应非常灵敏可以扩增目的基因序列超过1000万倍，在使用Pfu酶时请注意避免微量待扩增DNA的污染，并尽量考虑设置不加模板的空白对照以确认是否有待扩增DNA的污染。
2）Pfu DNA polymerase在扩增DNA片断时的出错率非常低，但其扩增效率也比较低。对于出错率要求不高的情况，例如RT-PCR进行定量或半定量，推荐使用Taq DNA polymerase。在扩增效率和出错率需要兼顾的情况，可以选择YTTaq DNA polymerase。在扩增2kb以下DNA片断时，Pfu酶和Taq酶的扩增效率相近。在准确性要求很高的情况下，须选择Pfu酶。
3）Pfu酶有3’至5’的外切酶活性，在没有dNTP的情况下可以降解引物。因此Pfu酶一定要最后加入，并且要在冰浴上操作。
4）不能使用Taq酶的PCR Buffer来替代Pfu酶的PCR Buffer。

根据您的关注的Pfu DNA聚合酶(Pfu酶)(含buffer)，您可能还对以下产品有需求：



名称：M-MuLV反转录酶(不含RNase H活性)
货号：ALH257
规格：10KU|10KU×5
本品是使用通过基因重组技术克隆表达的点突变型RNase H活性缺失的M-MuLV反转录酶。野生型的M-MuLV包含的RNase H活性能够催化降解DNA/RNA杂合体中的RNA，因此在cDNA第一条链的合成反应中可能会降解RNA/DNA杂合体中的模板RNA。本酶M-MuLV(RNase Hˉ)的RNase H活性缺失，与M-MuLV 相比，具有更强的延伸能力和稳定性，可用于较长的cDNA合成以及高比例的全长cDNA文库的构建等。本酶浓度200 units/μl，合成cDNA片段长度最高可达12kb。

试剂盒组分(10KU)：
M-MuLV RTase(200U/μl)———————10000U
5×RT Buffer————————————500μl

注意事项：
1. 避免RNase污染。
2. 为保证反转录成功建议使用高质量的RNA样品。
3. 如果RNA模板GC含量丰富或者有复杂二级结构，可以先只加RNA模板、引物和和RNase free H2O混匀，65℃变性5分钟，冰上冷却，短暂离心后加入其它成分继续下面的反转录步骤。

储存条件：-20℃。

本制品别名：M-MuLV反转录酶(RNase H活性缺失)|N-MuLV Rtase

名称：一步法荧光定量RT-PCR试剂盒
货号：ALH195
规格：50μl×50次|50μl×100次
本试剂盒是采用SYBR Green I 嵌合荧光法进行Real Time PCR 的专用试剂，用本制品进行Real Time qRT-PCR 可在同一反应管内连续进行。反应过程中无需打开管盖添加试剂并可对扩增产物进行实时检测，避免了污染的同时提高了检测灵敏度和实验效率。非常适合于微量RNA 尤其是微量RNA病毒的检测。本试剂盒包括最适合Real Time PCR的突变改造M-MuLV H Minus逆转录酶、热启动HotMaster Taq DNA聚合酶和RNasin抑制剂mix、同时包含适用于逆转录和PCR扩增的优化独特反应体系。本酶M-MuLV(RNase Hˉ)的RNase H活性缺失，与M-MuLV 相比，具有更强的延伸能力和稳定性。同时该酶提高了耐热性，可以在42-50℃反转录，提高了复杂二级结构，GC含量丰富模板反转录效率。而采用优质热启动酶HotMaster Taq DNA Polymerase可以最大限度的减少PCR扩增全程中的非特异性扩增产物产生，大大提高了荧光定量PCR反应的精确性。本制品可以在宽广的定量区域内得到良好的标准曲线，对靶基因进行准确定量检测，重复性好，可信度高。

试剂盒组份(50次)：
2 XqRT-PCR Mix (含Sybr Green I)-——————1.25ml
OneStep Enzyme Mix—————————————100μl
RNase free H2O———————————————1.5ml

适用范围：适用于高拷贝、低拷贝基因检测；部分高GC含量或具有复杂二级结构的RNA模板。

注意事项：
1. 当同时需要进行数次Real Time One Step qRT-PCR反应时，应先配制各种试剂的混合液（Master Mix，其中包括RNase-free ddH2O、Buffer、各种酶等），然后再分装到每个反应管中。这样可使所取的试剂体积更准确，减少试剂损失，避免重复分取同一试剂。同时也可以减少实验操作或实验样品之间产生的误差。
2. 使用Enzyme Mix时，分取之前要小心地瞬间离心收集到反应管底部；由于酶保存液中含有高浓度的甘油，粘度高，分取时应慢慢吸取。
3. 2×qRT-PCR Mix内含Sybr Green I，保存或配制One Step qRT-PCR反应液时应避免强光照射。
4. 为保证反应成功建议使用高质量的RNA模板。
5. 不同的片段，所需最佳RNA模板用量不同，过多的RNA会抑制反应，建议根据反应调整模板用量。
6. 只能使用特异性引物，不能使用Oligo(dT) 和Random Primer 进行反应。

储存条件：-20℃，有效期12个月。

本制品别名：一步法qRT-PCR试剂盒|一步法RT-qPCR试剂盒

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货号	名称	规格
WE0140	实时荧光定量PCR预混体系(SYBR GreenⅠ)	5ml
ALH611	长片段DNA超速PCR MasterMix	1ml|5ml
ALH270	一步法反转录试剂盒	50μl×50次|50μl×100次
SY0045	dNTP套装(100mM each)	4×400μl
SY0292	第一链cDNA Synthesis Super Mix for RT-qPCR(+gDNA wiper)	200T
JN0005	第一链cDNA合成试剂盒(预混试剂)(去除基因组DNA)	50次|100次