特别提示：包括SYBR Green Ⅱ核酸染料(10000×)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：SYBR Green Ⅱ核酸染料(10000×)
英文名称：SYBR Green II nucleic acid dyes
产品货号：BTN140234
产品规格：100μL

SYBR Green II染料是一种高敏感的核酸染色试剂，可以对RNA或者是单链的DNA进行染色。不传统的EB等染料相比，SYBR Green II染料具有灵敏度更高，低毒安全，可用于杂交前RNA质量的检测而不影响的转膜等显著优点。

产品特点：
1. 灵敏度高，信噪比高，样品荧光信号强，背景信号低。可检测出100pg RNA或者单链DNA。不EB相比，SRBR Green II -RNA 复合物所激发的荧光是EB-RNA 复合物激发荧光的7倍。在变性琼脂糖/尿素胶等条件下，SYBR Green II的灵敏度但仍高于EB，使用300nm 透射光显影，非变性凝胶中检测核酸的灵敏度可以达到5×10-7克。
2. 操作简单，无须脱色或冲洗。使用方便，丌影响其它修饰酶作用。完全可以代替银染，同时还兊服了银染实验过程复杂、操作繁琐、费时的缺点。
3. SYBR Green II 丌是特异性的结合RNA或者DNA 单链，其对单链的结合效率是双链的约2倍。不其他大部分核酸染料丌同，SYBR Green II 不RNA 结合的荧光量子产率和荧光范围高于不DNA 结合。
4.荧光范围广，可使用多种成像设备观测。最大激发波长在497nm处，次激发波长在245nm 附近。发射波长在520nm处产生。
5.适用范围广，可适用于多种电泳分析、DGGE和SSCP 及RNA 质量分析实验。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
SYBR Green II染料检测核酸时即可用于预染也可电泳后染色。

1.预染实验
 取1μL 贮存液加入1ml TE缓冲液或者灭菌双蒸水中混匀，再加入1ml的6×loading buffer上样缓冲液混匀(此时溶液为1：2000 稀释，即为工作液)电泳时取1-2ul工作液和5ul电泳样品混匀后直接上样。
2.电泳后染色
a.电泳后，在室温、避光的情况之下准备染色液。染色液要在塑料器皿中制备而丌要在玻璃器皿中，因为玻璃表层对该试剂有吸附作用。
b.染料取出后室温放置，恢复室温后简单离心混匀。
c.染色液使用1×TBE缓冲液进行1：10，000 稀释。如果是琼脂糖甲醛变性胶，用1×TBE做1：5000的稀释。由于SYBR Green II RNA染色液灵敏度高，所以要选用新鲜的1×TBE缓冲液进行稀释，以克缓冲液中残存的杂质产生背景，影响实验结果。注意：为提高染色的灵敏度，需要保证缓冲液的PH 值7.5-8 之间。
d. 把胶放在塑料的染色容器中，加入足够染色液使之覆盖整块胶。用铝箔遮盖或者是放在暗处避光。在染色之前没有必要先将胶中的变性剂如尿素和甲醛洗出来，因为本产品复合物发出的荧光在甲醛或者尿素存在时丌会猝灭。
e.在室温下轻轻摇晃凝胶。聚凝胶的最佳染色时间是10-40分钟，琼脂糖凝胶的最佳染色时间是20-40分钟。染色时间也可能随着凝胶的厚度和浓度变化。由于其荧光本底很低，凝胶染色后无需脱色。染色工作放在2-8℃ 避光保存，可以重复使用3-4次。
 注意：SYBR Green II RNA染色液丌影响RNA 向膜上的转移和northern中的后续实验。
3.染色胶显色和成像
 本产品所激发的荧光可以使用300nm和254nm光波照射，通过Wratten 15滤光片检测。注意：由于荧光本底较低，所以可以通过适当延长曝光时间的方法检测痕量的核酸。

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名称：绿如蓝核酸染料(UV)
货号：BTN70303
规格：1.5mL
目前最常见的替代EB的核酸染料SYBR Green I(属于花氰类染料)虽然毒性比EB低、灵敏度比EB高，但由于其化学稳定性差(怕光、怕水、怕热)，实验结果的重复性往往不尽人意；此外，SYBR Green I在电泳过程中能在DNA分子间移位，很容易使DNA 条带模糊和扭曲，电泳清晰度和分辨率也不如EB。所以在实际应用中依然不能有效替代EB。本产品是同时具有EB 稳定性和SYBR Green I低毒性的新性核酸染料

产品特点：
1.低毒。其主要成分未发现对人体有致癌性、未被列入有毒有害品，有利于保护使用者的健康和保护日益恶化的环境。
2. 灵敏。检测灵敏度跟EB相当，能满足常规核酸电泳实验要求。
3. 稳定。对光、水和热的稳定性跟EB相当，可加入琼脂糖凝胶中反复熔化。
4. 无分子间位移现象。不会出现SYBR染料常见的条带模糊和扭曲现象。
5. 使用方法多样。既可以加入熔化的胶中，也可以电泳后染色，还可用于PAGE。
6.跟各种常用的核酸电泳缓冲液(如SuperBuffer-2、TBE、TAE)兼容，但在SuperBuffer-2和TBE中背景最低。
7. 观察时不需要任何额外的仪器设备或UV光源，可以使用现成的观察EB的300nm UV。
8.可用于RNA染色(也呈绿色)。
9. DNA或RNA浓度较高时还可以直接在日光下观察(需要将胶放在黑色背景下)。由于避免了UV 对DNA的伤害，尤其适用于胶回收实验。

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
注意:虽然本产品的主要成分未发现对人体有致癌性、未被列入有毒有害品，但操作时最好还是戴上塑料手套。

使用方法之一：电泳中染色DNA(RNA的染色跟DNA完全一样)。
本方法是将DNAGREEN 直接加入溶化的凝胶中使用，只适用于琼脂糖凝胶电泳，不适用于PAGE。
1. 将DNAGREEN 直接加入到融化的琼脂糖凝胶中，每100mL凝胶加3-10μl DNAGREEN，混合均匀后倒胶。琼脂糖凝胶中不能含任何其他染料(如EB和SYBR Green I，否则会相互干扰)。在100mL 琼脂糖凝胶中加入DNAGREEN的量不要超过10μl，否则背景将很强。注意：一定要保证琼脂糖彻底熔化，尤其是在第一次熔化胶的时候，否则未熔化的小颗粒将产生跟染料相同的荧光。
2. 将DNA样品与DNA上样液按比例混合后上样。注意：一定要使用不含SDS等去污剂的上样液，否则SDS 会跟染料结合，极大地降低灵敏度。
3.上样后电泳，电泳参数同常规的电泳。如果使用百奥莱博五分钟核酸电泳液SuperBuffer-2，需要较高电压，详见该产品说明书。
4.电泳结束后在300nm左右的UV下观察。注意：不要使用波长为260nm或360nm的UV，否则检测灵敏度会降低。如果DNA或RNA浓度较高，还可以直接在日光下直接观察(需要将胶放在黑色背景下)，避免UV 对DNA的伤害，尤其适用于胶回收实验。
 注：显色结果：在紫外下，DNA浓度非常高的时候是白色，浓度低的时候是绿色的，单链核酸有时是红色的。
5. 用配置了520-550nm 滤光片(一般呈黄色或深黄色)的相机拍照。注意：不要使用与EB 兼容的红色滤光片(它能阻挡520-550nm的光)。如果能再加上能滤去UV的滤光片，效果会更好。
6.后续 Southern、转膜或DNA胶回收实验按常规操作进行。

使用方法之二：电泳后染色DNA
本方法是在电泳后对DNA进行染色，适用于琼脂糖凝胶电泳和PAGE。但该方法需要单独的染色处理，染料用量较大，不推荐用于琼脂糖凝胶的染色。
1. 按照常规方法进行电泳。
2. 用去离子水将DNAGREEN 稀释500倍后(100mL 水需要加0.2mL DNAGREEN)，将凝胶放入，室温下摇晃染色30分钟(对琼脂糖凝胶)或15分钟(对PAGE)。
3. 用水脱色 10-30分钟，具体时间需根据背景强弱决定，其余同方法一。
 注意：电泳后染色液可以反复使用次数。

疑难解答：
Q：本产品可否用于RNA染色？
A：可以，不论RNA是在甲醛变性胶中电泳，还是在普通的SuperBuffer-2、TBE或TAE胶中电泳，RNA染色后在300nm下都跟DNA一样呈绿色。
Q：本产品是否可以加入上样液中进行染色？
A：不行，本产品只能直接加入凝胶中进行染色或电泳后再染色。
Q：为何前端(靠近正极)的DNA 条带很淡或根本看不见？
A：跟EB一样，电泳时DNAGREEN 朝负极方向移动，当前端的DNA(最小片段)进入没有DNAGREEN的区域时，已经结合的染料分子会逐渐从DNA分子上脱落，所以条带会变淡或根本看不见。解决办法之一是缩短电泳时间或电泳后再染色；之二是在每100mL电泳缓冲液中补加3-5μL染料。
Q：本产品在哪种缓冲液中效果最好？
A：DNAGREEN染料在不同缓冲液中背景荧光强度不同，从弱到强的顺序是：
 SuperBuffer-2、TBE、TAE。在背景较强的缓冲液体中，可以适当降低染料的用量，比如100mL胶中加3-5μl。最佳浓度需要稍做摸索。
Q: 为何电泳后前面部分(靠近正极)的胶呈白色，后面的胶呈黑色？
A: DNAGREEN染料带正电，电泳时往上走，胶的黑色部分是染料上移后留下的无染料胶。
 本产品在TAE中背景最强，可参考上个问题答案更换电泳液以降低背景值。
Q：用SYBR染色的DNA在电泳时为何容易发生条带模糊和扭曲现象？
A：SYBR染料一般与DNA的小沟结合，但在常规电泳条件下该结合并不牢固，染料分子可以在标记的和未标记的DNA分子之间转移，使DNA分子的泳动速度时快(无染料结合时)时慢(有染料结合时)，发生条带模糊和扭曲现象。嵌入型染料(如EB和本产品)与DNA 结合牢固，则无此现象。
Q：核酸染料是否都有毒性？
A：核酸染料对动物和人的毒性由多方面决定。
 一是染料的膜通透性，EB 被归类为强诱变剂是由于其分子量较小，容易进入细胞内。而EB 二聚体Ethidium Homodimer(EthD)嵌入DNA的能力比EB 强上千倍，但毒性很小，就是由于其分子比EB大，不能透过细胞膜，所以毒性反而更低。SYBR 系列染料虽然低毒，但由于一般都溶于DMSO(因为容易水解，不能使用水溶液做溶剂)中，所以如果溅到皮肤表面，更容易进入皮肤。
 二是染料是否容易被人体降解。比如EB在体外就很难降解，一旦进入体内能在人体内残留的时间可能比较长，增加了毒性；而SYBR Green I等染料(也能以嵌入方式与DNA 结合)由于不稳定，比较容易自然降解，所以毒性自然较低。
 三是降解产物是否有毒性，比如用很多方法(如强碱法)降解EB 得到的产物有的比EB 毒性更大，而有的染料降解产物毒性却低很多，甚至无毒。
 四是染料进入细胞核以后是否能跟DNA 结合，很多实验结果显示即使EB染料也很难嵌入型到染色体中，因为染色体中的DNA 已经紧密地与各种组蛋白结合。
 五是细胞修复突变的能力，正常人体都有很强的修复突变的能力，如修复日光中UV 诱导的DNA突变。总之，一种DNA染料的毒性强弱是多种因素综合的结果。

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