特别提示：包括T4 DNA连接酶(400U/μL)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：T4 DNA连接酶(400U/μL)
产品货号：CZ036
产品规格：2万U/10万U

产品简介:
T4 DNA连接酶在辅助因子ATP的作用下，可催化双链DNA或RNA上的5’-磷酸末端和3’-羟基末端之间形成磷酸二酯键，可用于催化平末端或黏性末端之间的连接反应，也可修复双链DNA、RNA或DNA/RNA杂交双链中的单链切口。在DNA片段与载体、Linker或Adaptor DNA的连接中具有广泛应用。
编号 组份 20000 U 100000 U 储存条件 保质期
① 10×T4 DNA Ligase Buffer 100 μL 500 μL -20℃ 2年
② T4 DNA Ligase 50 μL 250 μL
单位定义：
在20 μL 1×T4 DNA连接酶反应缓冲液中，6 μg λDNA/Hind III的酶切产物在16℃下反应30分钟，50%的DNA片段被连接所需的酶量定义为1个活性单位。
失活或抑制：
65℃加热10分钟可使T4 DNA连接酶失活。
产品特点：
高纯度，确保该产品具有最高的活性和纯度，无核酸酶、外切酶、RNA酶、外源DNA/RNA等污染。
操作说明：
1．在冰浴条件下，将下列反应液加入无菌、无核酸酶微量离心管中：
a．10×T4 DNA连接缓冲液需于室温下解冻后混匀。
b．插入DNA的加入量需为载体DNA的3倍摩尔量。
c．T4 DNA连接酶需最后加入反应体系中。
2．使用移液器轻柔吹打均匀后，短速离心；
3．对于黏性末端，可于16℃孵育过夜或室温孵育10分钟；对于平末端或单碱基突出片段，则可于16℃孵育过夜或室温孵育2小时；
4．置于65℃加热10分钟，使酶失活；
5．冰浴冷却后，取1～5 μL反应液转化至50 μL感受态细胞中。

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货号	名称	规格
BTN140576	大肠杆菌DH10Bac化学感受态细胞	0.1mL*10
BTN120520	大肠杆菌OrigamiB(DE3)化学感受态细胞	10*100μl
BTN131234	地塞米松	1mL
YT449	ISRE荧光素酶报告基因质粒(干扰素激活反应元件)	1μg
ALH351	通用型T载体克隆菌落PCR检测试剂盒	80次|400次
SY0278	X-Gluc	100mg

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名称：平末端DNA加T试剂盒
货号：BTN60106
规格：50次
本产品利用Taq DNA polymerase的不依赖于模板的末端转移酶活性，在只有dTTP存在的情况下，在平末端的DNA片段加上一个dT尾巴，主要用于制备T载体。其流程图如下：


产品特点：
1. 简单，2X Tailing Buffer中含有所需要的所有成分,不需要单独准备。
2.适用于任何平末端的DNA片段，包括Pfu DNA成本polymerase等酶合成的DNA片段。
3. 加T后的载体可以作为T载体使用。

产品组成：

成分	规格
Taq DNA olymerase(5U/μL)	50μl
2×dT Tailing Buffer	1.25ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一：反应前纯化处理：
平末端DNA片段或平末端质粒DNA可以采取胶回收和酚/lǜ仿抽提法等常规方法纯化，最后溶解在水或TE中，终浓度以0.1μg/μL为宜。必须注意的是，用Vent，Deep Vent，Pfu，Pwo等具有3到5外切活性的DNA聚合酶扩增得到的DNA片段，必须经过彻底的去除残留的酶的处理过程(如酚/lǜ仿抽提或Proteinase K处理)，否则它们将在加T反应时，切除掉加上的T尾巴，干扰反应。
二：加T反应
在干净的0.5mL或1.5mL离心管中，分别加入下列成分：

回收的DNA片段	0.2-2μg
2×dT Tailing Buffer	25μL
Taq DNA polymerase(5U/μL)	1μL
补水到	50μL
72℃保温2小时

三：反应后处理
加T反应后，Taq DNA polymerase将与DNA末端紧密结合，所以必须酚/lǜ仿抽提去除。如果使用Proteinase K处理后再用酚/lǜ仿抽提效果会更好。得到的DNA溶于适量水和TE中后即可用于后续连接反应。