特别提示：包括9°N DNA聚合酶(无外切酶活性)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：9°N DNA聚合酶(无外切酶活性)
英文名称：9°N DNA Polymerase(exo-)
产品货号：MT0033
产品规格：100U|1000U

本品是9°N DNA聚合酶中的突变体，具有较强的掺入修饰底物的能力，如：ddNTP、rNTP 和acyNTP，因此其适用于核糖核酸置换法DNA测序、ddNTP或acyNTP的链终止法测序或SNP分析。该酶来源于E. coli菌株，此菌株含有从Thermococcus species 9°N-7中克隆的经过基因工程改造的9°N（D141A/E143A/A485L) DNA聚合酶基因。

产品应用：
1．提高了修饰核苷酸的掺入能力
2．部分核糖核酸置换法测定 DNA 序列
3．ddNTP或acyNTP的链终止法用于测序或SNP 分析

产品组成：

组分	100U	1000U
9°N DNA Polymerase（exo-)(2 U/μl)	50μl	500μl
5×Best PCR Buffer	1ml×2	5ml

保存条件：-20℃，有效期3年。

单位定义：一个活力单位即在在74℃条件下，30分钟内催化10nmol dNTP的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量。

使用方法：
1．按下表配制反应液：

加入物	加入量
9°N DNA Polymerase（exo-)(2 U/μl)	1μl
5×Best PCR Buffer ?	10μl
dNTP Mixture（2.5 mM each) ?	?2μl
模板DNA?	?1 ng~1μg
Primers（10μM）?	?0.25~1μl
ddH2O ?	? Up to 50μl

模板DNA用量参数(50μl反应体系)：gDNA 100-1000 ng；Plasmid DNA 5-30 ng；cDNA from RT reaction 1-5μl

2．PCR扩增循环参数：

温度	时间	循环
95℃	2s	1st Cycle
95℃	20s	30-40 Cycles
Tm	20s
72℃	0.5kb/1分钟
72℃	2分钟	Last Cycle

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储存条件：低温运输、-20℃保存，有效期一年。

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本产品是一管式反转录预混Mix，内含反转录第一链合成所需的所有试剂(MMLV、Random primers、Oligo dT Primer、dNTP Mixture、反应Buffer等)，用户只需加入模板 RNA和RNase-Free 水即可进行反应。

产品特点：
1. cDNA的合成更加方便，用户只需准备模板和水即可进行反应。
2.快捷，操作步骤已经最大限度地简化，能减少污染，降低实验误差。
3. 效率高，特殊优化的oligo dT和N6 随机引物配比，反转录效率高。
4. 速度快，只需42℃，20分钟即可完成cDNA 第一链的合成。
5. 能够用于GC含量高，二级结构复杂的RNA 模板，合成cDNA片段长度可达12kb。
6. 兼容性好，合成的cDNA可直接用于荧光定量PCR反应，灵敏度高、稳定性好。

试剂盒组成：

成分	规格
2×RT MasterMix	0.1ml
RNase-Free 水	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 解冻后颠倒轻弹混匀各组分，以20μL 体系为例，按下表加入(2×RT Master Mix很粘稠，取用前请短暂离心，并避免吸头外壁沾附损失)：
2×RT MasterMix

10μl
Total RNA/mRNA 模板(自备)	50ng-2μg/5-200ng
补RNase-Free 水到	20μl

 注意：对于二级结构很复杂的RNA 模板，推荐使用变性步骤，即在操作步骤之前，将模板RNA在65℃孵育5分钟后迅速转移到冰上，再进行下一步操作。
2. 轻轻混匀，42℃孵育20分钟进行反转录反应。
 注意：对亍二级结构复杂或者GC含量高的模板，可以提高温度至50℃，以增强反转录效率。
3. 85℃加热5秒钟灭活反转录酶置冰上备用(更长时间保存请置于-20℃)。

注意事项：
1. 实验过程中请注意避免RNase污染，防止RNA降解或实验中的交叉污染。
2. 使用之前请完全溶解并充分混匀，以防因盐离子浓度丌均影响实验结果。
3. 使用后应尽快放回-20℃，避免反复冻融。
4. RNA模板的完整性对cDNA合成效率起着决定性作用，因此请选择可靠的RNA提取/纯化方法。
5. 如果扩增片段较长或者RNA结构复杂，为了加强转录效果，可以将RNA单独置于65-70℃加热5-10分钟后再加入体系。
6. 操作人员请带口罩和一次性手套，并经常更换手套。