特别提示：包括核酸释放剂(用于PCR)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：核酸释放剂(用于PCR)
英文名称：Nucleic Acid Releaser
产品货号：BTN61202
产品规格：10mL

本产品专用于从各种常见的生物样品中快速提取用于核酸扩增的DNA样品和RNA样品。

产品特点：
1．单溶液，操作简单，只用一步（约5-10分钟）即可以得到用于核酸扩增的模板，不需要任何离心、抽提等操作步骤，比常用的Chelex100提取方法和苯酚/氯fǎng方法快。
2．即可用于DNA模板，又可用于RNA模板。
3．跟各种后续实验兼容，包括PCR、RT-PCR、LAMP和RT-LAMP。
4．兼容性广，可以用于几乎所有的分子生物学样品，包括细菌、昆虫、真菌、各种植物、各种动物、法医样品（包括全血液、血痕、精斑、唾液、毛发、组织样品、口腔细胞和FTA卡）、石蜡组织切片等。
5．环保健康，不使用任何有毒有害的试剂。
6．本产品只能用于科研，尤其适用于大规模育种筛选，不能用于临床。
7．本规格足够200次核酸扩增实验

保存条件：常温，有效期一年。

使用方法：
1．将约2μL液体样品（如全血、细胞培养液、病毒样品、粪便样品）或2mg（约半粒芝麻大小）的固体样品（如动物组织、植物叶片、种子等）加入到50μL本产品中。
  注意：样品加入量可能需要根据其DNA的含量稍做调节，如果样品DNA含量少，则用量要增加，但总液体样品用量最好不要超过本产品用量的1/10；固体样品用量最好不要超过1 mg/10μL的比例。
2．对液体样品，室温放置3分钟；对固定样品80℃加热5分钟；对难以破裂的样品（如有厚壁的真菌、石蜡组织切片、血斑），则保温时间可以延长到10-30分钟。
3．简短振荡混匀后取样品裂解液直接进行PCR扩增或其他扩增（裂解物体积最好不要超过反应体积的2/5，对50μL体系的扩增，加入的裂解液最好不要超过20μL。由于各扩增体系成分不同，首次跟本产品组合时最好做梯度测试，即在50μL的扩增反应中分别加5μL、10μL、15μL、20μL、25μL样品裂解液进行测试）。
4．其余同常规操作。

疑难解答：
问：本产品与美国BioVenture的GeneReleaser有何区别？
答：本产品处理简单，只需要80℃加热5分钟即可；而GeneReleaser加热处理复杂而繁琐，共需要9步处理，累计时间需要10余分钟量（具体是65℃ 30s，8℃ 30s，65℃ 90s，97℃ 180s，8℃ 60s，65℃ 180s，97℃ 60s，65℃ 60s，80℃放置），手工操作时十分难以控制。
问：用本产品提取的DNA能否用电泳方法检测？
答：由于DNA含量太少，不能用电泳方法检测。

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名称：柱式血清血浆DNA提取试剂盒
货号：BTN130979
规格：50次

名称：柱式动物线粒体DNA提取试剂盒(测序级)
货号：BTN120501
规格：15次
本试剂盒就是基于先纯化动物细胞线粒体、再从中柱式法纯化其DNA的两步法试剂盒。

试剂盒特点：
1. 即开即用，用户不需要自己配制各种溶液，优化各种条件。
2. 两步法，先纯化线粒体，再柱式法纯化其中的DNA，有粗提(mtDNA纯化前不用DNase处理线粒体)和精提(mtDNA纯化前用DNase处理线粒体)两套操作方案，适合于各种要求不同的后续实验。
3. 本产品一次可以处理约107×108个培养细胞，10mg培养细胞(相当于5瓶150 mm培养细胞)可以纯化到到0.2-0.5mg线粒体。
4. 本产品适用于各种动物悬浮培养细胞和贴壁培养细胞，不建议用于动物实体组织。
5. 提供线粒体染液，可以在操作中随时监测纯化过程中线粒体的完整性。

试剂盒组成：

成分	规格	备注
溶液A	225ml	配制匀浆液
蔗糖	25.4g	配制匀浆液
詹纳斯染色液	1ml	染色线粒体
溶液B	0.5ml	配制核酸酶反应液
DNase A干粉	1mg	酶切细胞核DNA
Benzonase(1U/μL)	100μl	酶切细胞核DNA
溶液C	10ml	纯化mtDNA
溶液D	5ml	纯化mtDNA
溶液E	20ml	纯化mtDNA
离心吸附柱	15套	纯化mtDNA
通用洗柱液	15ml	纯化mtDNA
DNA洗脱液	10ml	纯化mtDNA
人TPMT VNTR	上游引物	GCT CCG CCC TGC CCA TTT
	下游引物	GCC TCC GCC ACC AAT GAC
人线粒体HV2区	上游引物	GGT CTA TCA CCC TAT TAA CCA C
	下游引物	CTG TTA AAA GTG CAT ACC GCC A
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存，保存期限一年。

使用方法：
注意：线粒体膜对温度高度敏感，所以整个操作必须在冰上或冷室进行，所要用到的溶液和离心管都必须预先冷却，否则线粒体容易破裂。

一：线粒体粗提
1. 称25.4g蔗糖到225mL溶液A中，盖上盖子后充分摇晃3～5分钟溶解即得250mL溶液A工作液，放冰上预冷待用。未用完的溶液A工作液需要-20℃保存，否则会长菌。
2. 如果是单层细胞，先用20mL PBS缓冲液洗涤107×108个培养的单层细胞，共洗涤2次。然后用塑料刮匙刮下细胞，重悬在20mL PBS缓冲液中。如果是悬浮细胞，则1000g 4℃离心10分钟收集107×108个细胞，再用20mL PBS缓冲液洗涤2次，最后将细胞重悬在20mL PBS缓冲液中。
3. 用平甩转子(swinging-bucket rotor)离心机1000 g 4℃离心10分钟，吸弃上清，保留细胞沉淀。
4. 加入5倍体积(以细胞沉淀的体积为基数)的溶液A工作液，轻柔重悬细胞。
5. 如果是成纤维细胞，由于其难于裂解，可将细胞重悬液在-80℃放置20-30分钟后再化冻，然后进入下步操作。如果不是，则直接进入下步操作。
6. 将细胞重悬液体转移到预冷的Dounce玻璃匀浆器中(工作体积为10-15mL，间隙为0.12 mm，最好是玻璃材质，否则线粒体产率会降低)匀浆适当次数。细胞株不同，其最适匀浆次数不同，一般需要40次-60次左右。匀浆是线粒体纯化最关键的步骤，故匀浆前最好先通过预实验确定最适匀浆次数，方法是每匀浆5-10次后，取2-3μl匀浆液到载玻片上，然后在相差显微镜下观察，完整细胞数量降低到20-50%以下为佳。
7. 用平甩转子离心机4℃ 1000 g离心10分钟。沉淀含残留完整细胞、细胞碎片和细胞核，上清液含线粒体。
8.转移上清液到离心管中，冰上放置待用。如有必要，可在显微镜下检测上清液中线粒体的完整性。具体做法是先滴一滴上清液到载玻片上，再滴入50μl詹纳斯染液染色20分钟，油镜下观察，蓝绿色颗粒状物即为线粒体。
9. 用固定角度转子(fixed-angle rotor)离心机4℃ 10000 g离心10分钟，弃上清，所得棕黑色沉淀即为粗提线粒体沉淀。
10. 用5mL溶液A工作液洗涤2次得线粒体粗提液(即重悬后，4℃ 10000 g离心10分钟，弃上清)。
11. 如果后续实验是提取mtDNA用于PCR或Southern杂交，则直接进入第3部分mtDNA提取，也可以放-80℃长期保存待用。
12. 如果后续实验是提取mtDNA用于高通量测序，则必须彻底降解掉其中的细胞核DNA污染。匀浆过程中一个破裂的细胞核释放出的DNA相当于上百万个线粒体的DNA量之合，所以无论如何小心，粗提线粒体中必有大量的细胞核DNA污染，如果不将其清除，高通量测得的序列将绝大部分来于核DNA而非mtDNA。

二：线粒体粗提液中细胞核DNA的去除及鉴定
13. 将线粒体重悬于0.3mL溶液A工作液中，取10μl作为未处理对照。
14. 加入6μl Benzonase(1U/μL)溶液和30μl DNase A溶液(配法：将0.5mL溶液B加到装有1mg DNase A干粉的离心管中得到2mg/mL溶液，未用完的部分需要分装后放-20℃保存)。
15. 37℃保温一段时间酶切细胞核DNA。注意：最好先预实验，每隔一段时间取10μl样品，灭活其中的DNase后作为模板用PCR扩增1-4个自选的VNTR位点和1-2个mtDNA基因(如vis或COII基因)，检测不到VNTR基因而能检测到mtDNA基因的处理时间为最佳。可从本公司另购细胞核基因和线粒体基因专一性引物。
16. 加入10μl自备的0.5M EDTA溶液(pH8.0)以终止酶反应。显微镜下检查线粒体完整性(见上节第8步)。
17. 用固定角度转子离心机4℃10000 g离心10分钟，弃上清。
18. 用1mL的溶液A工作液洗涤沉淀(即重悬后，4℃ 10000 g离心10分钟，弃上清。此为一次洗涤。)2次得到线粒体沉淀。

三：线粒体DNA提取
19.在不超过100μl的线粒体沉淀中加入600μl预热的溶液C到沉淀中，充分吹打均匀。
20. 再加入150μl(可称150-160mg)预热的溶液D到离心管中，颠倒数次混匀。此时溶液中可能有白色丝状悬浮物产生。
21. 65℃放置3～5分钟。
22. 加入200μl自备氯fǎng，震荡混匀10-30秒，此时溶液将呈乳白色。
23. 12000～15000g室温离心2分钟。此时上清液将变得透明，中间层有白膜。小心转移上清液到一个新的1.5mL塑料离心管中，避免触及中间的白膜。
24. 加入1.5倍体积的溶液E，颠倒混匀后全部转移到离心吸附柱中，室温放置至少2分钟。
25. 12000rpm室温离心1分钟，弃收集管中的穿透液。
26. 通用洗柱液洗涤2次(将0.5mL加入离心柱中，12000rpm室温离心1分钟，弃穿透液，此为洗涤一次，再重复一次)。
27. 空甩半分钟去除残留液体,将离心吸附柱转移到新的1.5mL离心管中。
28. 加30-50μl DNA 洗脱液，室温放置3～5分钟。
29. 12000rpm室温离心1分钟即得纯化的mtDNA溶液。

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货号	名称	规格
BTN90901	菌体内毒素清除剂	200mL
BTN60805	中草药DNA提取试剂盒	20次
BTN120406	柱式植物叶绿体DNA提取试剂盒	15次
YT012	哺乳动物基因组DNA抽提试剂盒	50次
YT014	蛋白酶K溶液(20mg/ml)	0.2ml|1ml
WE0186	鼠尾基因组DNA提取试剂盒	50次
ALH151	大量植物样本DNA提取试剂盒	10次