末端脱氧核糖核酸转移酶(TdT酶)--性能参数，报价/价格，图片

基本信息

产品名称：

末端脱氧核糖核酸转移酶(TdT酶)

英文名称：

Terminal Deoxynucleotidyl Transferase

国产/进口：

国产

产地/品牌：

百奥莱博

型号：

YT512

参考报价：

销售商：

北京百奥莱博科技有限公司

总点击数：

2616

更新日期：

2025-07-31

产品类别：

分子生物学试剂

性能参数

特别提示：包括末端脱氧核糖核酸转移酶(TdT酶)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：末端脱氧核糖核酸转移酶(TdT酶)
英文名称：Terminal Deoxynucleotidyl Transferase
产品货号：YT512
产品规格：500U

本酶是一种模板依赖的DNA聚合酶，可以催化在寡核苷酸、单链或双链DNA的3"羟基端加上dNTP。可以催化的寡核苷酸的最短长度为3个核苷酸。

用途：寡核苷酸或DNA 3"羟基末端标记；DNA末端加尾(DNA tailing)；5"-RACE；合成同一种脱氧核苷酸的寡聚链等。
来源：由大肠杆菌表达，表达基因的来源为小牛胸腺。
活性定义：37℃60分钟内，催化1nmol dNTP加入到多聚核苷酸3"羟基末端中所需的酶量定义为1个活性单位。
酶活性检测条件：200mM potassium cacodylate(pH7.2),1mM CoCl2,0.1mM DTT,0.01%(v/v)Triton X-100,10μM oligo(dT)10,1mM dTTP and 0.4MBq/ml[3H]-dTTP。
纯度：不含DNA内切酶和外切酶，不含RNase。
酶储存溶液：100mM KAc(pH6.8),2mM 2-mercaptoethanol,0.01%(v/v)Triton X-100 and 50%(v/v)glycerol 。
Reaction Buffer(5X)：0.125M Tris(pH7.2 at 25℃),1M potassium cacodylate,0.05%(v/v)Triton X-100,5mM CoCl2。
失活或抑制：70℃加热10分钟或加入适量EDTA均可导致Terminal Deoxynucleotidyl Transferase失活。金属离子螯合剂，较高浓度的铵根离子、氯离子、碘离子和磷酸根均对Terminal Deoxynucleotidyl Transferase有抑制作用。
储存条件：-20℃。

使用说明：

1. DNA 3’末端标记：
a. 参考如下表格设置反应体系：
待标记DNA————————————————————10 pmol of 3"-termini
Reaction Buffer (5X) ——————————————10µl
[α-32P]-ddATP, ~10TBq/mmol (3000Ci/mmol)————1.85 MBq (50µCi)
TdT (20U/µl) ——————————————————2µl
补充无核酸酶的去离子水 —————————————至50µl
b. 按上表设置好反应体系后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用 Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
c. 37℃孵育15分钟。
d. 70℃孵育15分钟或加入5µl 0.5M EDTA终止反应。
说明：标记的效率和3’羟基末端的类型有关，3’突出末端的标记效率要显著高于3’缩进末端或平末端的标记效率。

2. DNA末端加尾(DNA Tailing)：
a. 参考下表格设置反应体系：
DNA片段 ————————————————————1 pmol of 3"-termini
Reaction Buffer (5X)——————————————4µl
dATP or dTTP——————————————————130pmol
或 dGTP or dCTP (四种中通常只需加入一种)————60pmol
TdT (20U/µl)——————————————————1.5µl
补充无核酸酶的去离子水—————————————至20µl
b. 按上表设置好反应体系后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用 Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
c. 37℃孵育15分钟。
d. 70℃孵育15分钟或加入5µl 0.5M EDTA终止反应。
说明：在上述反应条件下，每个3’羟基末端可以加上100-130个dA或dT，或20-30个dC或dG。

3. 其他用途可以参考上述用途或适当的文献资料进行。

根据您的关注的末端脱氧核糖核酸转移酶(TdT酶)，您可能还对以下产品有需求：

名称：Klenow片段(无外切酶活性)
货号：YT510
规格：100U
本酶是没有外切酶活性的Klenow片段，是大肠杆菌聚合酶I(E.coli.DNA polymerase I)的大片段(Large Fragment)缺失了外切酶活性的突变体。Klenow Fragment，Exo-保留了DNA聚合酶I的5"→3"聚合酶活性，但缺少完整的Klenow酶的5"→3"和3"→5"外切酶活性。

特点：由于Klenow Fragment，Exo-没有外切酶活性，其在末端补平时经常会在3"末端额外加上1个或多个核苷酸，因此不能用于产生平末端而用于后续的连接。
用途：5"突出末端的标记；随机引物法进行DNA标记；Sanger双脱氧法进行DNA测序等。
来源：由大肠杆菌表达，表达基因的来源为突变的 polA 基因片段。
分子量：约68kDa(单体)。
活性定义：37℃30分钟内，催化10nmol脱氧核糖核苷酸(dNTPs)摻入到多聚核苷酸中所需的酶量定义为1个活性单位。
酶活性检测条件：67mM potassium phosphate(pH7.4)，6.7mM MgCl2，1mM 2-mercaptoethanol，0.033mM dATP，0.033mM dTTP，0.4MBq/ml[3H]-dTTP，62.5μg/ml poly(dA-dT)·poly(dA-dT)。
纯度：不含DNA内切酶，不含RNase。
酶储存溶液：25mM Tris-HCl(pH7.5)，0.1mM EDTA，1mM DTT，50%(v/v)glycerol。
Reaction Buffer(10X)：500mM Tris-HCl(pH8.0 at 25℃)，50mM MgCl2， 10mM DTT。
失活或抑制：75℃加热10分钟或加入适量EDTA均可导致Klenow Fragment，Exo-失活。金属离子螯合剂，无机焦磷酸盐(PPi)，大剂量的无机磷酸盐(Pi)均对Klenow Fragment，Exo-有抑制作用。
储存条件：-20℃。

使用说明：

1. 随机引物法进行DNA标记：
a. 参考如下表格设置反应体系：
DNA———————————————————————————————10µl(100ng)
Reaction Buffer (10X)——————————————————————5µl
125µM random decamer or hexamer primer——————————————10µl
补充无核酸酶的去离子水——————————————————————至40μl
混匀后沸水浴孵育5-10分钟，立即置于冰浴冷却。进行后续步骤前离心沉淀液
3 dNTP Mixture (0.25mM each , without the labeled—————————4μl
[α-32P]-dNTP, ~110 TBq/mmol (3000Ci/mmol)————————————1.85MBq (50μCi)
Klenow Fragment，Exo-———————————————————————1µl (5U)
补充无核酸酶的去离子水———————————————————————至50µl
b. 按上表设置好反应体系后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用 Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
c. 对于random decamer primer，37℃孵育5分钟；对于random hexamer primer，37℃孵育10分钟。
d. 加入4μl 0.25mM dNTP，混匀后37℃孵育5分钟。
e. 加入1μl 0.5M EDTA，pH8.0终止反应。
f. 取1μl上述液体用于检测标记的效率。
g. 用Sephadex G-50或Bio-Gel P-60或其它适当试剂盒纯化标记好的探针。

2. 双链DNA 5’突出(5’ overhang)末端的标记：
a. 参考如下表格设置反应体系：
Digested DNA ——————————————————————————10~15µl(0.1~4μg)
Reaction Buffer (10X)——————————————————————2µl
[α-32P]-dNTP, ~15-30 TBq/mmol(400-800Ci/mmol) —————————0.74 MBq(20μCi)
或 [α-32P]-dNTP, ~110 TBq/mmol(3000Ci/mmol)———————————2.96 MBq(80μCi)
3 dNTP Mixture (2.5mM each , without the labeled）————————2μl
Klenow Fragment，Exo-———————————————————————0.2μl (1U)
补充无核酸酶的去离子水———————————————————————至20µl
b. 按上述体系配好之后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用 Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
c. 30℃孵育15分钟。
d. 75℃孵育10分钟终止反应。

3. 其他用途可以参考上述用途或适当的文献资料进行。

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