特别提示：包括大肠杆菌TOP10 菌种在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：大肠杆菌TOP10 菌种
英文名称：E.coli TOP10 Strain
产品货号：BTN12-81y
产品规格：0.5 mL

大肠杆菌TOP10菌种是一种用于克隆和质粒制备的K-12系菌种。

产品特点：
1．核酸内切酶缺陷，能够有效提升制备的质粒DNA的质量。
2．三条重组途径均失去活性，能够有效提高DNA插入片段的稳定性。
3．EcoK甲基化修饰和限制系统缺失，故可用EcoK位点甲基化和非甲基化的DNA（如PCR产物）进行转化并制备非甲基化的DNA。
4．McrA、McrBC和Mrr三套依赖于甲基化的限制系统缺失，可用甲基化的DNA（如基因组DNA）进行转化制备非甲基化的DNA。
5．如果质粒携带?-半乳糖苷酶?片段，则可用蓝白筛选法筛选重组子。
6．具有链霉素抗性和2-脱氧半乳糖抗性。

大肠杆菌TOP10菌种的基因型：
K-12,F^-，araD139,Δ(ara-leu)7697,deoR,endA1,?80lacZ?M15,galU,galK,ΔlacX74,mcrA,Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC),nupG,recA1,rpsL(Sm^R)

大肠杆菌TOP10菌种基因型符号及其含义列表如下：

基因型	表现型
K-12	K-12系的所有菌种默认都携带F因子和λ、e14、rac三种原噬菌体。其中的e14携带野生型mcrA基因，其产物可对甲基化的CG切割。
F-	本菌种缺失F因子
araD139	不能代谢阿拉伯糖
Δ(ara-leu)7697	不能自身合成亮氨酸
deoR	deo操纵子阻遏蛋白失活，脱氧核糖组成型合成
endA1	核酸内切酶I缺失
φ80lacZΔM15	φ80原噬菌体上携带lacZΔM15，其编码β-半乳糖苷酶基因ω片段，与携带α片段的质粒互补可恢复酶活性，用于蓝白斑筛选
galU	葡萄糖-1-磷酸尿苷酰转移酶失活，不能合成半乳糖，对2-脱氧半乳糖抗性
galK	半乳糖激酶失活，不能利用半乳糖，对2脱氧半乳糖抗性
ΔlacX74	lac操纵子和邻近区域缺失，不能代谢乳糖
mcrA	在此菌种中，e14原噬菌体携带的mcrA基因缺失，故不能对甲基化的CG切割
△(mrr–hsdRMS-mcrBC)	缺失对甲基化C的限制、缺失EcoK修饰限制系统，缺失对甲基化A的限制
nupG	同deoR，核苷酸转运突变，使得细胞组成型合成核苷酸，用于质粒制备
recA1	ATP依赖型重组酶失活，recBCD、recE和recF三条重组路径均复丧失，重组率降低1万倍。适合扩增有回文结构的高拷贝质粒
rpsL	30S核糖体S12突变，导致对链霉素抗性

保存条件：-80℃保种保存，有效期一年。

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该菌株来源于在大肠杆菌B系的、广泛用于外源蛋白表达的BL21（DE3）菌株中转入一个pLysS质粒而得，主要用于表达对宿主有毒性、一般情况下很难表达的那些基因。

产品特点：
1．染色体上携带由lacUV5启动子控制的T7 RNA聚合酶基因，故在IPTG诱导下，可以高效表达T7启动子驱动的外源基因。
2．携带pLysS质粒，该质粒使菌株为氯霉素(34μg/mL)抗性，其lysS基因编码的T7溶菌酶可以阻止T7 RNA聚合酶和其启动子的结合，阻断背景表达，故本菌株主要用于毒性蛋白的表达。
3．由于pLysS的复制起始位点为p15A型，跟复制起始位点为ColE1和pMB1型的质粒兼容，故外源基因可以克隆到pUC系列或pBR322系列的质粒中。
4．缺失lon和ompT两个蛋白酶基因，有利于外源蛋白的纯化。
5．EcoB系统Eco位点识别能力缺失，导致EcoB甲基化修饰和限制功能均失，甲基化和非甲基化质粒均可转入本菌种。
6．本菌株具有氯霉素抗性。

基因型：
大肠杆菌BL21(DE3)pLysS菌种的基因型是：B系，F-,pLysS,lon-11,Δ(ompT-nfrA)885,Δ(galM-ybhJ)884,?DE3[lacI lacUV5-T7 gene 1 ind1 sam7 nin5],Δ46,[mal+]K-12(λS),hsdS10(各文献上报道的基因型稍微有所不同，此处采用美国耶鲁大学Coli Genetic Stock Center的资料)。

大肠杆菌BL21(DE3)pLysS基因型符号及其含义列表如下：

基因型符号	含义
B系	B系大肠杆菌默认基因型是lon-dcm-，lon突变是lon启动子有一个IS186插入突变，使ATP依赖性蛋白酶Lon缺失，提高重组蛋白产量；dcm突变使胞嘧啶甲基化酶失活，CCWGG中的第二个C不再被甲基化，可通过影响甲基化依赖的突变修复系统而提高突变率
F-	不携带F质粒
lon-11	描述见上
pLysS	携带pLysS质粒，由T7基因3.5(即溶菌酶基因)克隆进pACYC184的BamHI位点而得，其复制起始位点为p15A型，为氯霉素抗性
λ(DE3[lacI lacUV5-T7 gene1 ind1 sam7 nin5])	染色体携带DE3 λ原噬菌体，此片段后者又携带lacI、sam7I等基因和由lacUV5启动子控制的T7 RNA聚合酶基因
Δ(galM-ybhJ)884	缺失galMKTE、modFE、acrZ、modABC、ybhA、pgl、ybhD、ybhH、ybhI和ybhJ基因
hsdS10	EcoB系统Eco位点识别能力缺失，导致甲基化修饰和限制功能均失
[mal+]K-12(λS)	malK、lamB、malM来于E.coli K-12，为野生型，通过转导获得。野生型的lamB使得菌株对?噬菌体感染敏感
Δ(ompT-nfrA)885	缺失从DLP12原噬菌体到Rhs因子这段区域，包括appY、ompT、envY、ybcH和nfrA五个基因。其中ompT编码外膜蛋白酶VII，其缺失降低了蛋白降解，有利于表达蛋白纯化

保存条件：-80℃保种保存，有效期一年。