特别提示：包括双荧光素酶报告基因检测试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：双荧光素酶报告基因检测试剂盒
英文名称：Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit
产品货号：KFS303
产品规格：100T

双萤光素酶报告基因检测试剂盒，是先以萤光素(luciferin)为底物来检测萤火虫萤光素酶(Firefly luciferase)，后以肠腔素(coelenterazine)为底物来检测海肾萤光素酶(Renilla luciferase)，并且在后续加入海肾萤光素酶底物时，同时加入抑制萤火虫荧光素酶催化luciferin 发光的物质，使后续检测仅仅检测到海肾萤光素酶的活性，实现双萤光素酶报告基因检测。萤火虫萤光素酶是一种分子量约为61kD 的蛋白，在ATP、镁离子和氧气存在的条件下，可以催化luciferin 氧化成oxyluciferin，在luciferin 氧化的过程中，会发出生物萤光(bioluminescence)。海肾萤光素酶是一种分子量约为36kD 的蛋白，在氧气存在的条件下，可以催化coelenterazine 氧化成coelenteramide，在coelenterazine 氧化的过程中也会发出生物萤光。生物萤光可以通过化学发光仪(luminometer)或液闪测定仪进行测定。

注意事项
1.无菌操作。
2.荧光染料操作中注意避光进行。
3.由于温度对酶反应有影响，所以测定时样品和试剂均需达到室温后再进行测定。
4.为保证荧光素酶检测试剂的稳定性，可以采取适当分装后避光保存的方法，以避免反复冻融和长时间暴露于室温。
5.萤火虫荧光素酶检测试剂、Renilla 荧光素酶检测试剂最好现用现配。
6.细胞裂解液及裂解时间可根据细胞量适当增加、延长。

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名称：萤火虫荧光素酶报告基因检测试剂盒
货号：SY0058
规格：100T|500T|1000T
报告基因检测是现代分子生物学研究领域中分析结构基因旁侧区域潜在的顺式元件（如启动子、增强子和沉默子等）和反式作用因子相互作用关系的一种重要工具。本萤火虫荧光素酶报告基因检测试剂盒（Firefly Luciferase Reporter Gene Aassy Kit），是通过萤火虫荧光素（luciferin）为底物来检测萤火虫荧光素酶。荧光素酶在 Mg2+和 O2 参与下催化荧光素氧化成oxyluciferin，在荧光素的氧化过程中，发出生物荧光（bioluminomescence），然后通过化学发光仪或液闪测定仪测定生物荧光。

产品特点
1）简便，快捷。
2）灵敏度高，可检测10-20 mol的荧光素酶。
3）安全，非放射性。
4）酶的浓度线性范围可达8个数量级。

产品组份：

组分	100T	500T	1000T
细胞裂解液	60ml	60ml×5	60ml×10
萤火虫荧光素酶检测试剂	10ml	10ml×5	10ml×10

保存：未拆封试剂盒-20℃避光保存，有效期为 6 个月。-70℃避光保存，有效期为一年。试剂盒内萤火虫荧光素酶检测试剂（Firefly luciferase assay reagent）避光保存，不能反复冻融。

实验步骤

1. 细胞裂解：
1）将转入报告基因的细胞中的培养基移除，加PBS轻轻洗涤。按如下方案加入细胞裂解液（Cell lysis buffer），然后将培养板放在微型振荡器上室温振荡15min，充分裂解细胞。

细胞培养板	96孔板	48孔板	24孔板	12孔板	6孔板
细胞裂解液（µl/孔）	30µl	60µl	120µl	250µl	500µl

【注】：裂解产物可室温保存6h，4℃保存16h，-70℃可长期存放。（裂解产物不能多次反复冻融）。
2）将充分裂解后的裂解产物，10000-15000rpm离心3-5min。离心后将上清液移入新的EP管中进行后续检测。
2.荧光素酶检测：
1）按照仪器说明书要求将荧光测定仪打开，设定参数，测定时间为10s，测定间隔为2s。
2）将样品按照20～100µl的体积（如果样品量足够，请加入100µl）加入测量管中（保持每次样品的加样量一致），另外加入萤火虫荧光素酶检测试剂（Firefly luciferase assay reagent）混匀 2-3 次（不能漩涡混匀），充分混匀后测定RLU（Relative light unit），同时设置细胞裂解液（Cell lysis buffer）为对照孔。

注意事项
1）温度会对酶的活性会产生影响，因此所有试剂应放置室温后再使用。
2）如用单管荧光测定仪测定，每个样品与测定试剂混合后到测定前的时间应保持一致。
3）萤火虫荧光素酶催化的生物发光的最强发光波长为 560nm。
4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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