特别提示：包括组织活性氧(ROS)检测试剂盒(DHE)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：组织活性氧(ROS)检测试剂盒(DHE)
产品货号：HR8821
产品规格：100T|200T

活性氧(Reactive oxygen species,ROS) 包括超氧自由基、过氧化氢、及其下游产物过氧化物和羟化物等，参与细胞生长增殖、发育分化、衰老和凋亡以及许多生理和病理过程。
组织活性氧检测试剂盒是一种利用荧光探针 DHE进行组织活性氧检测的试剂盒。本试剂盒中的DHE ROS探针为红色荧光的活性氧探针，具有510/610nm的最大激发/发射波长。
DHE ROS探针在组织中活性氧存在的条件下，被氧化生成红色荧光物质，红色荧光强度与组织内活性氧水平成正比，检测DHE产物的荧光就可以知道组织内活性氧的水平。
系列活性氧探针具有多种颜色可以选择，可根据情况对样品进行多色标记实验。除了本试剂盒的红色荧光探针，我公司还可以提供绿色荧光的活性氧检测试剂盒。
激发波长510 nm，发射波长610 nm附近，使用荧光分光光度计、荧光酶标仪、等检测DHE产物荧光，从而测定组织内活性氧水平。
本试剂盒可以用于各种动物和植物样本的检测。本试剂盒提供了活性氧阳性对照试剂，以便于活性氧的检测。
本试剂盒只可以用于新鲜组织样本的活性氧检测，不可以用于冻存的组织样本的活性氧检测。

储存条件：匀浆液2-8℃保存；探针-20℃避光保存；阳性对照-20℃保存。
【注】：
●染料长期不用可以-20℃保存。避免反复冻融。
●染色液DHE为DMSO溶液，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
● 可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
有效期：一年。

※ ※ ※ 使用前请仔细阅读产品说明书 ※ ※ ※
使用限制：本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
产品更新：我公司会更新或升级产品，以优化和增强其使用性能，产品说明书会进行相应的版本更新。使用产品时，请参照随产品附带的说明书，不要参照网上下载的说明书，可能是不同的版本。需要最新电子版说明书时可以在收到产品后发邮件索取。
使用安全：使用时需要合适的实验室外套，一次性手套。避免皮肤或粘膜与试剂接触。如果试剂不小心接触皮肤或眼睛，应立即用水冲洗。

注意事项：
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
● 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
● 样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
● 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
● 实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。

产品特点：
● 使用方便：可用荧光分光光度计、荧光酶标仪检测；
● 背景低，灵敏度高；
●线性范围宽，使用方便。
试剂盒以外自备仪器和试剂耗材：
仪器：
● 激光共聚焦显微镜或荧光分光光度计或荧光酶标仪 激发波长488-535 nm，发射波长610 nm。
● 离心机● 移液器● 冰箱● 冰盒
试剂：
● PBS缓冲液(pH7.4，实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液)
●或者HBSS(With：Calcium Magnesium Glucose；Without：Phenol Red。)
●蛋白定量试剂
耗材：
● 离心管● 吸头

使用方法：

使用注意事项：
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
● DHE染色液为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
● 使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。
● 尽量缩短探针标记后到测定所用的时间，以减少各种可能的误差。
● 选做，阳性对照诱导剂可以按照1:1000的比例使用。例如标记好探针的细胞共1毫升，可以加入1μl的阳性对照诱导剂刺激。通常刺激后20-30分钟内可以观察到非常显著的活性氧水平升高。对于不同的细胞，活性氧阳性对照的效果可能有较大的差别。如果在刺激后30分钟内观察不到活性氧的升高，可以适当提高活性氧阳性对照诱导剂的浓度。如果活性氧升高得过快，可以适当降低活性氧阳性对照诱导剂的浓度。
样本处理：
1．刚取得的新鲜组织样本用PBS洗净。
2．准确称取50mg组织，加入1ml匀浆缓冲液A，用玻璃匀浆器充分匀浆。
3．在1000g，4℃离心10分钟，弃沉淀，取上清。
样本检测：
1．在96孔板中加入190μl匀浆上清液、10μl DHE探针，用移液器吹打，使之充分混匀。
【注】：
● 选做：如有必要，可以做一个阳性对照，匀浆上清加入探针后再加入10μl阳性对照。
2．在37℃避光孵育30分钟。
3．置于荧光酶标仪中，后于激发波长为488-535nm、发射波长610nm检测荧光强度。
蛋白定量：
1．另取50μl上清匀浆液，用PBS大约稀释30倍。
2．取100μl进行蛋白定量。
结果处理：
以荧光强度/毫克蛋白表示组织活性氧强度。

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