特别提示:包括植物线粒体提取试剂盒在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:植物线粒体提取试剂盒
英文名称:Plant Mitochondrion Extraction Kit
产品货号:XH005
产品规格:50T|100T
本试剂盒可用于从植物叶片组织中分离出完整而纯化的线粒体。适合于田间采摘或者实验室培养的植物叶片中线粒体的制备。其制备物,可以被用于细胞凋亡、信号传递、代谢和蛋白组学等的研究。但不适用于进一步DNA提取。
试剂盒组成:
| 组份 |
50T |
100T |
| Lysis Buffer |
100mL |
200mL |
| β-巯基乙醇 |
1mL |
1mL |
| Mito-Wash Buffer |
25mL |
50mL |
| Store Buffer |
5mL |
10mL |
保存条件:4℃可保存3个月,长期保存可置-20℃。
操作步骤:
1.样本采集前处理:无论田间自然生长还是实验室组织培养,采摘前须避光生长24-48小时,以减少叶片组织中糖类及叶绿体含量。取适量Lysis Buffer,加入0.5% β-巯基乙醇,10ml Lysis Buffer加入50μlβ-巯基乙醇,混匀,形成Lysis Buffer/β-巯基乙醇溶液,此溶液可2~8度保存一个月。
2.叶片用蒸馏水清洗2-3次,滤纸吸干,有条件请用液氮研磨叶片1-2克,研磨完后,取800mg左右研磨的叶片粉,加入1.5ml预冷的Lysis Buffer/β-巯基乙醇溶液,混匀。如果无条件(无液氮),请预冷研钵,取洗过的叶片1000mg,用剪刀剪为碎块放入玻璃匀浆器或者研钵中。加入1.5ml预冷的Lysis Buffer/β-巯基乙醇溶液,冰上研磨至看不见明显组织块;
3.将研磨物放置合适的离心管,4℃,1000×g离心5min;
4.将上清转移到一新的离心管中,在沉淀中加入0.5ml Lysis Buffer/β-巯基乙醇溶液,混匀,再次4℃,1000×g离心5min,取上清;合并两次上清,将上清4℃ 1000×g再次离心5min。
5.取上清,加入一新的离心管中,4℃,16,000×g离心10min。离心后的上清含胞浆成分,可从中提取胞浆蛋白。将上清转移到新离心管,线粒体沉淀在管底。
6.在线粒体沉淀中加入0.5mL Wash Buffer重悬线粒体沉淀,4℃,1000×g离心5min;
7.取上清,加入一新的离心管中,4℃,16,000×g离心10min。弃上清,高纯度的线粒体沉淀在管底;
8.用50 -100μL Store Buffer或合适的反应缓冲液重悬线粒体沉淀,立即使用或-70℃保存。
注意事项:
1.以离心力g计算正确的离心速度,不同的离心机可据此精确计算离心速度。
2.进行Western Blot和2D-胶电泳,可直接在第7步的沉淀中加入上样缓冲液裂解线粒体。
3.β-巯基乙醇有毒,请注意通风及防护。
一般低温度心机都有离心力显示,如果没有,可以用以下公式简单的换算。
G=1.11×(10
-5)×R×[rpm]
2
G为离心力,一般以g(重力加速度)的倍数来表示;[rpm]
2即:转速的平方;R为半径,单位为厘米。
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名称:动物线粒体提取试剂盒
货号:HR0233
规格:50T|100T
线粒体(mitochondria)是真核细胞中产生能量的重要细胞器。细胞中的能源物质-脂肪、糖、部分氨基酸在此进行最终的氧化,并通过偶联磷酸化生成ATP,供给细胞生理活动之需。
对线粒体结构与功能的研究通常是在离体的线粒体上进行的,本试剂盒用简便快速的方法即可在40分钟内提取得到线粒体。
本试剂盒可用于各种动物细胞和实体软、硬组织样本的线粒体提取。不能用于冷冻样品的线粒体提取。
储存条件:2-8℃保存。
有效期:一年。
注意事项:
●本试剂盒仅供科学研究使用,不可用于诊断或治疗。
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖和管内壁上的液体离心至管底,避免开盖时试剂损失。
● 禁止与其他品牌的试剂混用,否则会影响使用效果。
● 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿,可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。
试剂盒以外自备试剂和仪器:
● 移液器、吸头 ●离心机及离心管 ● 涡旋振荡器 ●冰箱,冰盒
使用方法:
使用注意事项:
● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
● 实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
● 最好使用 Dounce 匀浆器匀浆,如果没有Dounce 匀浆器,用普通1ml 玻璃匀浆器匀浆也可。
细胞线粒体提取:
1.取1-2×107个细胞,在4℃,500×g条件下离心2-3分钟,小心吸取培养基,尽可能吸干,收集细胞;
2.用冷 PBS 洗涤两次,每次洗涤后尽可能吸干上清。
3.加入400μl冷的试剂A,置冰上10分钟。
4.用 Dounce匀浆器匀浆30-40下,然后在4℃,500×g条件下离心5分钟。
5.快速将上清吸入另一预冷的干净离心管。
6.在 4℃,11000×g以上条件下离心20分钟。
7.在沉淀中加入400μl冷的试剂B,混匀。
8.在 4℃,11000×g以上条件下离心20分钟。
9.弃上清,沉淀用线粒体保存液重悬。
10.即得到线粒体样品,置冰箱备用或直接用于下游实验。
组织线粒体提取:
1.取50-100mg新鲜动物组织样本,用PBS洗涤干净。
2.用剪刀尽可能剪碎,用冷 PBS 洗涤两次。
3.加入 400μl冷的试剂A,置冰上10分钟。
4.用 Dounce匀浆器匀浆30-40下,然后在4℃,500×g条件下离心5分钟。
5.快速将上清吸入另一预冷的干净离心管。
6.在 4℃,11000×g以上条件下离心20分钟。
7.在沉淀中加入400μl冷的试剂B,混匀。
8.在 4℃,11000×g以上条件下离心20分钟。
9.弃上清,沉淀用线粒体保存液重悬。
10.即得到线粒体样品,置冰箱备用或直接用于下游实验。

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