特别提示:包括WB抗体清除液(中性,去污剂法)在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:WB抗体清除液(中性,去污剂法)
产品货号:KFS063
产品规格:500ml
Western Blot 抗体清除缓冲液(Stripping buffer),用于Western Blot 中做完免疫杂交之后的膜重复利用。在Western 中完成了一抗二抗结合和后续的化学发光检测后,有时还需要检测其它蛋白,通过使用抗体清除液,充分去除结合的一抗二抗,可以非常方便地重新利用使用过的膜检测其它蛋白。和重新跑一个SDS-PAGE 胶相比,不仅省时省力,而且可以消除重新上样而带来的误差,使可比性更强。
Western Blot 抗体清除缓冲液,经过多个抗体的检测试验,通常可以重复利用膜3-5 次。
中性抗体清除液基于去污剂法,无腐蚀性,可快速地应用于PVDF 膜上一抗和二抗的去除。
使用说明
1. 在完成Western 化学发光检测后,蒸馏水中漂洗5 分钟。
2. 弃蒸馏水,加入适量的Western 一抗二抗去除液(中性),至少需把膜完全覆盖。在摇床上漂洗10 分钟。
3. 弃抗体清除液,并吸尽残余液体。加入TBS、TBST 或PBS 漂洗3-4 次,每次在摇床上漂洗3-5 分钟。
4. 进行封闭(blocking)等Western 的后续操作。
注意事项
1. 为取得最佳效果,推荐使用PVDF 膜。
2. 如多次重复使用同一张膜5 次以上,有可能会导致蛋白信号的减弱,建议膜重复使用不超过5 次。
3. 使用ECL 等类似的化学发光试剂进行的Western Blot 检测适用本试剂。使用非化学发光试剂进行的Western Blot检测,例如DAB,NBT/BCIP 等,不适用于本试剂。
储存:4℃,有效期12个月。
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名称:十二烷基磺酸钠
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储存条件:常温运输和保存,有效期一年。
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货号:YT619
规格:1L|10×1L
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注意事项:
1. 配制好的电泳液使用时间不宜超过两周。
2. 回收的电泳液可以重复使用,但为了取得最佳的电泳效果,应使用没有使用过的电泳液。
储存条件:室温,有效期2年。
名称:SDS-PAGE浓缩胶缓冲液(4×)
货号:WE0286
规格:200ml
本产品为配制SDS-PAGE浓缩胶缓冲液,可用于配制各种浓度的变性及非变性PAGE凝胶,方便、快捷。产品中已加入10%SDS,使用时不用另外加入。
操作步骤:
根据目的蛋白分子量大小选择合适的PAGE分离胶配制浓度,最佳胶浓度请参考附表1。
I 灌制分离胶(各试剂使用量请参考附表2)
1、参照凝胶模具说明书,装配好凝胶模具。
注:加入上层筛板有助于加样时保持填料与样品均匀接触,是否加入上层筛板可根据实际情况选择。
2、将不同体积的30%Acr-Bis(29:1)、分离胶缓冲液和纯水在小烧杯或试管中混合。
3、加入10%APS和TEMED,轻轻搅拌使其混匀,避免产生气泡。
4、在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液(对于mini-gel,凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5 cm或距梳齿约0.5 cm即可), 然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1 cm的水层,使凝胶表面保持平整。
5、静置30-60分钟,待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后,表面凝胶已聚合。
II 灌制浓缩胶(各试剂使用量请参考附表3)
1、去除覆盖在分离胶上的水层。
2、将不同体积的30%Acr-Bis(29:1)、SDS-PAGE Stacking Gel Buffer(4×)浓缩胶缓冲液和纯水在一个小烧杯或试管中混合。
3、加入10%过硫酸铵和TEMED,轻轻搅拌使其混匀,避免产生气泡。
4、将浓缩胶溶液加至分离胶的上面,直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端。
5、将梳子插入凝胶内,避免产生气泡。
6、静置10~20分钟,等待浓缩胶聚合。
7、待凝胶聚合后,小心地拔出梳子,以免破坏加样孔。
8、进行常规电泳操作。
附表1. SDS-PAGE分离胶的浓度与最佳分离范围
SDS-PAGE 分离胶浓度 |
最佳分离范围 |
6%胶 |
50-150 kD |
8%胶 |
30-90 kD |
10%胶 |
20-80 kD |
12%胶 |
12-60 kD |
15%胶 |
10-40 kD |
附表2. 配制SDS-PAGE分离胶
分离胶浓度 |
凝胶体积 |
所需各组分体积(单位:ml) |
纯水 |
30%Acr-Bis(29:1) |
分离胶缓冲液(4×) |
10%APS |
TEMED |
6% |
5ml |
2.75 |
1.0 |
1.25 |
0.05 |
0.004 |
10ml |
5.5 |
2.0 |
2.5 |
0.1 |
0.008 |
15ml |
8.25 |
3.0 |
3.75 |
0.15 |
0.012 |
20ml |
11 |
4.0 |
5 |
0.2 |
0.016 |
8% |
5ml |
2.42 |
1.33 |
1.25 |
0.05 |
0.003 |
10ml |
4.8 |
2.7 |
2.5 |
0.1 |
0.006 |
15ml |
7.25 |
4.0 |
3.75 |
0.15 |
0.009 |
20ml |
9.7 |
5.3 |
5 |
0.2 |
0.012 |
10% |
5ml |
2.08 |
1.67 |
1.25 |
0.05 |
0.002 |
10ml |
4.17 |
3.33 |
2.5 |
0.1 |
0.004 |
15ml |
6.25 |
5.0 |
3.75 |
0.15 |
0.006 |
20ml |
8.3 |
6.7 |
5 |
0.2 |
0.008 |
12% |
5ml |
1.75 |
2.0 |
1.25 |
0.05 |
0.002 |
10ml |
3.5 |
4.0 |
2.5 |
0.1 |
0.004 |
15ml |
5.25 |
6.0 |
3.75 |
0.15 |
0.006 |
20ml |
7.0 |
8.0 |
5 |
0.2 |
0.008 |
15% |
5ml |
1.25 |
2.5 |
1.25 |
0.05 |
0.002 |
10ml |
2.5 |
5.0 |
2.5 |
0.1 |
0.004 |
15ml |
3.75 |
7.5 |
3.75 |
0.15 |
0.006 |
20ml |
5 |
10.0 |
5 |
0.2 |
0.008 |
附表3. 配制5%SDS-PAGE浓缩胶
凝胶体积 |
所需各组分体积(单位:ml) |
纯水 |
30%Acr-Bis(29:1) |
浓缩胶缓冲液(4×) |
10%APS |
TEMED |
2ml |
1.14 |
0.34 |
0.5 |
0.02 |
0.002 |
4ml |
2.28 |
0.68 |
1 |
0.04 |
0.004 |
6ml |
3.42 |
1.02 |
1.5 |
0.06 |
0.006 |
8ml |
4.56 |
1.36 |
2 |
0.08 |
0.008 |
储存条件:2~8℃
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