特别提示:包括鸡败血支原体荧光定量PCR试剂盒(探针法)在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:鸡败血支原体荧光定量PCR试剂盒(探针法)
英文名称:Mycoplasma galliscepticum qPCR Kit(Probe Method)
产品货号:BTN15-74070
产品规格:50次
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名称:禽腺病毒单重荧光PCR检测试剂盒
货号:SYA391
规格:48次/盒
一、
简介:
本试剂盒用一对禽腺病毒特异性引物,结合一条特异性探针,用荧光PCR技术对禽腺病毒DNA进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染动物的病原学诊断。
二、
用途:
该试剂盒适合于检测呼吸道分泌物棉拭子(感染I群禽腺病毒的鸡、火鸡、鹅、鹌鹑)、卵巢、输卵管、卵泡、子宫和输卵管粘膜组织、泄殖腔拭子(感染II、III群禽腺病毒的鸡、鸭)等样本中的禽腺病毒(AADV),用于禽腺病毒(AADV)感染的辅助诊断及流行病学调查,其检测结果仅供参考。
三、
试剂盒组成:(48T)
组份 数量 规格
AADV反应液(AADV-qPCR MIX) 1管 720μL/管
核酸提取液(DNA Extraction) 2管 1.5mL/管
阴性对照(NTC) 1管 50μL/管
AADV阳性对照(AADVPTC) 1管 50μL/管
四、
储存条件及有效期:
本试剂盒于-20℃以下保存,有效期为6个月。
五、
荧光PCR仪器适用范围:
ABI系列,Roche系列等荧光定量PCR检测仪等。
六、
样品的采集与DNA提取
6.1
样品的采集
病死禽取卵巢、输卵管、卵泡、子宫和输卵管粘膜组织;活鸡取呼吸道拭子或泄殖腔拭子,放于1ml 50%甘油生理盐水中。
6.2 样品前处理
组织样品:每份组织分别从3个不同的位置称取样品约1g,手术剪剪碎混匀后取0.05g于研磨器中研磨,加入1.5mL生理盐水后继续研磨,待匀浆后转至1.5mL灭菌离心管中,8000rpm离心2min,取上清液100μL于1.5mL灭菌离心管中;泄殖腔拭子直接取100μL提取。
6.3
DNA提取
可采用PCR试剂盒配备的DNA抽提液,按以下说明进行DNA核酸的粗提。也可采购北京百奥莱博技有限公司生产的DNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品,并按照相应试剂盒说明进行操作。
6.31 纯培养物:取培养物50μL与50μL DNA抽提液充分混匀,100℃恒温10min,13000rpm离心3min,取上清5μL进行PCR反应。
6.3.2 粪便样品:挑取米粒大小粪便于灭菌离心管中,加入0.5mL生理盐水,振荡混匀,取50μL样品,加入50μL DNA抽提液充分混匀,100℃恒温10min,13000rpm离心3min取上清5μL进行PCR反应。
6.3.3 组织研磨液、拭子、血清、血浆及其他液体标本:取处理好的标本50μL,加入50μl DNA抽提液充分混匀,100℃恒温10min,13000rpm离心3min取上清5μL进行PCR反应。
注:阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取),直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高,建议最后在样品制备区域加入阳性对照。
七、
检测步骤
7.1
试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(AADV-qPCR MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 15µL N×15µL
计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(AADV-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2
qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃ 延伸时收集荧光信号 。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX 参比荧光。
八、结果分析
8.1
结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整,以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2
试验成立判定
(1) 阴性对照(NTC): 不应产生任何的扩增曲线。
(2) 阳性对照(AADV-PTC):均产生扩增曲线。
(3) 以上条件应同时满足 ,否则,此次试验视为无效。
8.3
结果判定
(1) 在试验成立的条件下,Ct值≤35,且曲线有明显的指数增长曲线,表明AADV核酸阳性。
(2) Ct值显示为无的样本为阴性样本,表明AADV核酸阴性。
(3) 如果Ct值>35,判为可疑样品。对于可疑样品,先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线,则为可疑阳性,否则判为阴性。
(4) 对于可疑阳性样品,重新抽提核酸,再次进行AADV 检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线,判为样本阳性,表明AADV核酸阳性;否则判为样本阴性。
九、
注意事项:
(1) 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
(2) 所有使用的离心管最好高压灭菌,而且必须不含DNA酶。
(3) PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等),防止实验室污染。
(4) 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行,以免污染。
(5) 试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。