特别提示:包括考马斯亮蓝快速染色液在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:考马斯亮蓝快速染色液
英文名称:Coomassie Blue Fast Staining Solution
产品货号:YT055
产品规格:250ml
本品是以考马斯亮蓝G250为染料,可用于SDS-PAGE或非变性PAGE等蛋白凝胶的无污染、快速、高灵敏染色,或Western转膜后PAGE胶上残余蛋白的检测。18分钟即可检测到100ng条带,约40分钟可检测到10ng条带,约50分钟即可获得背景非常低的凝胶染色,约150分钟即可获得几乎完美的无背景染色的蛋白条带。
本考马斯亮蓝快速染色液是一种无毒,无刺激性气味的高度环保型染色液。普通的常规方法需使用剧毒的甲醇及强刺激性的乙酸,而百奥莱博的考马斯亮蓝快速染色液则采取全新配方,实现了染色时的无毒和无刺激性气味。
本品可以进行高灵敏染色(详细请参考使用说明),最低可以清晰检测到10ng的蛋白电泳条带,参考下图。

蛋白凝胶加入50ml去离子水微波炉高火煮3min,换去离子水后再煮3min,摇床摇5min,染色30min,脱色2h后的效果图。蛋白(BSA)上样量如图中所示,清晰可见10ng条带,并且凝胶背景已经脱色至几乎完美的无色。
快速染色时,使用本考马斯亮蓝快速染色和常规的考马斯亮蓝染色相比,效果基本一致,参考下图。

百奥莱博考马斯亮蓝快速染色液(采用快速染色方法)和常规考马斯亮蓝法染色蛋白凝胶的染色效果对比。常规方法使用百奥莱博的考马斯亮蓝染色试剂盒(常规法)。蛋白样品为BSA,凝胶为12% SDS-PAGE。考马斯亮蓝快速染色液染色前,凝胶在去离子水中煮沸3min,摇床摇5min,然后用考马斯亮蓝快速染色液染色10min,再用去离子水脱色10min(不脱色也可以观察到类似条带,但背景会深一些)。
无需对蛋白和凝胶进行固定,可以不进行脱色,操作更加简单。本染色液和质谱分析兼容,即经过本染色液染色的蛋白条带或蛋白点与常规的考马斯亮蓝G250染色一样,可以用于后续的质谱分析。
注意事项:
1. 本染色液呈酸性,有轻微腐蚀性,使用时请作必要防护。
2. 需自备去离子水。如无去离子水,也可以使用双蒸水。
3. 如果使用微波炉加热,请特别注意避免沸腾。以免因暴沸而导致凝胶碎裂。
储存条件:4℃,有效期一年。
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名称:Bradford法蛋白定量试剂盒
货号:BTN80814
规格:100mL
Bradford法测定蛋白质浓度是最为常用的蛋白检测方法之一,在酸性条件下,考马斯亮蓝染料能与蛋白质结合形成复合物,其最大吸光值也由465nm转移到595nm,通过颜色的强弱测定蛋白质浓度的高低。本产品是基于Bradford法蛋白检测原理开发的产品。
产品特点:
1.快速,10-20个样品只需要10分钟即可完成测定。
2.稳定,加样混匀后2分钟既可测定,1小时内吸光度变化不超过10%。
3.线性范围在 50~1000μg/mL。
4.最小测量体积为1-20μL,最低测量蛋白量为0.5μg。
5.即开即用,不需要单独购买每个成分再配制。
6.有常规和微量两种检测模式。
7.不受绝大部分样品中的化学物质的影响。巯基乙醇的浓度可高达1M,二硫苏糖醇的浓度可高达5mM。
8.但受略高浓度的表面活性剂影响,各种蛋白质与染料的结合效率可能有差异。
试剂盒组成:
成分 |
规格 |
溶液A |
100ml |
BSA标准(2mg/mL) |
1ml |
滤纸 |
20张 |
说明书 |
1份 |
储存条件:常温运输和保存,BSA 标准-20℃保存,有效期一年。
使用方法:
一、
常规检测流程:
此方法在蛋白浓度30-1000μg/mL范围内呈现R2 = 0.996的直线线性回归,可精确定量蛋白浓度在此范围内的蛋白样品。
1.制备 1×工作液。溶液A与无菌水按1:4 比例充分混合即为1×工作液(例:4mL溶液A+ 16mL 无菌水 = 20mL 1×工作液)。
2.滤纸过滤。过滤后的工作液室温条件下可稳定使用1-2 星期。
3.检测:蛋白样品与1×工作液按1:50 比例混合(例:100μl蛋白样品 + 5mL 1×工作液,适用于3mL的比色杯;40μl蛋白样品 + 2mL 1×工作液,适用于1mL的比色杯;20μl蛋白样品 + 1mL 1×工作液,适用于平底透明96孔板)。
4.加样后,充分混匀。
5.室温放置5分钟。
6.检测吸光度。波长设定 = 595nm。
注意事项:
1.不同型号、规格的滤纸,具有不同的孔径,导致可通过的分子各不相同。请使用本公司指定提供的滤纸,否则会导致不同的测定结果。
2.检测样品之前,应首先制备蛋白标准曲线。一般可使用BSA。
a)常规检测:建议使用下述浓度的BSA。
0μg/mL、31.25μg/mL、62.5μg/mL、125μg/mL、250μg/mL、500μg/mL、750μg/mL、1000μg/mL
b)微量检测:建议使用下述浓度的BSA。
0μg/mL、2.5μg/mL、5μg/mL、7.5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL。
3.检测细胞提取物或纯化蛋白样品,应使用相应的缓冲液制备蛋白标准曲线。
4.用 96孔板测定时,应确保没有气泡,否则会绝对增加吸光度的读数。
5.此检测试剂不受绝大部分样品中的化学物质的影响。巯基乙醇的浓度可高达1M,二硫苏糖醇的浓度可高达5mM。但受略高浓度的表面活性剂影响。若SDS高于0.1%,TritonX-100高于0.1%,Tween20,60,80高于0.06%,可取少量样品加水稀释到适当浓度,再行测定。
二、
微量检测流程:
此方法在蛋白浓度1~20μg/mL范围内呈现R2=0.992的直线线性回归,可精确定量蛋白浓度在此范围内的蛋白样品。
1.蛋白样品与溶液A按4:1比例混合,例:
蛋白样品 |
溶液A |
适用性 |
400μL |
100μL |
平底透明96孔板 |
2mL |
0.5mL |
1mL的比色杯 |
4mL |
1mL |
3mL的比色杯 |
2.加样后,充分混匀。
3.室温放置5分钟。
4.检测吸光度。波长设定= 595nm。
注意事项:
1.Bradford蛋白浓度测定的显色反应受许多去污剂的影响。应避免使用SDS,Triton X-100,Tween等溶解蛋白样品。对于难溶解的蛋白样品,可用1MNaOH 溶解和稀释。
2.Bradford蛋白浓度测定的显色反应依赖于蛋白中精氨酸残基的数目,因此不同蛋白间测定的差异可能较大。
3.标准品曲线配制时,如果吸量不准确或者加样枪不精确会造成标准曲线相关系数减小,可根据需要使用倍比梯度稀释的方法来配制,或者使用精确度高的加样枪。
4.由于Bradford法在蛋白浓度增高到一定时候,颜色反应并不成比例增加,因此得到的标准曲线只是在一定范围内可以近似看成直线,每次应按照实际测得的标准曲线计算出相对精确的蛋白浓度。
5.不像其它一些蛋白浓度测定方法(包括Lowry法),Bradford法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响。样品中巯基乙醇的浓度可高达1M,二流苏糖醇的浓度可高达5mM。但受略高浓度的去垢剂影响。需确保SDS低于0.125%,Triton X-100低于0.125%,Tween 20低于0.06%,可以考虑用超纯水稀释,透析/除盐,ACETONE/TCA沉淀蛋白后重溶于超纯水等方法来消除干扰物质的影响。