特别提示：包括小牛肠碱性磷酸酶（CIP）在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：小牛肠碱性磷酸酶（CIP）
英文名称：Calf intestinal alkaline phosphatase (CIP)
产品货号：SV1060
产品规格：5KU|1KU|500U

特性:
克隆载体去磷酸化，防止载体自连
T4 多聚核苷酸激酶标记 DNA 末端前的去磷酸化
测序或 SNP 分析前 PCR 反应中 dNTP的处理
DNA 和 RNA 的去磷酸化
概述:
小牛肠碱性磷酸酶（CIP）催化 DNA 和 RNA 5´ 和 3´ 磷酸单脂的去磷酸化反应。另外，CIP 水解核糖和脱氧核糖核苷三磷酸（NTP 和 dNTP）。CIP 在分子生物学研究中应用广泛，如去除 DNA 和 RNA 末端的磷酸基团，用于后续的克隆和探针末端标记。在克隆中，对线性载体去磷酸化，防止自连。该酶可以作用于 5´ 突出端、凹陷端和平末端。CIP 也可以用来降解 PCR 反应中的游离 dNTP，用于制备测序模板和 SNP 分析。
来源:
小牛肠粘膜。
反应条件:
1X 反应缓冲液
[50 mM KAc, 20 mM Tris-Ac, 10 mM Mg(Ac)2, 100 μg/ml BSA (pH 7.9 @ 25℃)]，37℃ 温育。
质保声明:
小牛肠碱性磷酸酶（CIP）经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。
单位定义:
1 单位指在 1 ml 反应体系中，37℃ 条件下，1 分钟催化 1 μmol 的对硝基苯磷酸盐（PNPP）水解成对硝基苯酚所需的酶量。
浓度:
10,000 units/ml。

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名称：MMLV逆转录酶
货号：BTN60905
规格：10000U
该酶是突变型的MMLV逆转录DNA聚合酶，从表达莫洛尼氏鼠白血病病毒reverse transcriptase基因(pol基因)的E.coli细胞中分离纯化而得，由一个分子量为76.1KDa的单亚基组成，可催化以单链DNA、RNA或DNA:RNA杂交链为模板的互补DNA链的聚合反应。跟野生型相比,它没有RNase H活性。

产品特点;
1．延伸性能好，可合成长达12.5 Kb的fμLl-length cDNA。
2．最佳反应温度为42℃，但在50℃时仍然有活性，70℃10分钟能使其失活。
3．能以Cy3-，Cy5-，rhodamine-，aminoallyl-，fluorescein等标记的nucleotides 为底物。
4．可用于first strand cDNA 合成，second strand cDNA 合成，DNA labeling，RNA primer extension等。
5．与PCR 兼容，RT产物可以用于PCR和real-time PCR。
6．能被金属螯合剂，无机磷酸，焦磷酸和多胺抑制。
7．没有RNase H活性。

产品组成：

成分	规格
MMLV逆转录酶(200U/μL)	50μl
5×RT Buffer	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有限期一年。

使用方法：

一、合成PCR用的1st-strand cDNA
1．按下表配制RT反应体系:

加入物	加入量
总RNA 或poly(A)mRNA 或专一的RNA	100-500 ng 10-500 ng 0.01pg-500ng
注：RNA样品不能有基因组DNA污染。
Oligo(dT)18(0.5ug/μL) 或随机引物(0.2ug/μL) 或RNA模板专一性引物	1μL 1μL 15-20pmol
注：随机引物于RNA模板的比例跟最后得到的cDNA的平均长度成反比
RNase-free水	补水到12μL

2．70℃保温5分钟后立即冰浴。
3．严格按下表顺序加入各成分：

5×RT Buffer	4μL
RNase Inhibitor(20U/μL)	1μL
dNTP(10mM each)	2μL

4．37℃保温5分钟。对富含二级结构的高GC RNA模板，可以改成45℃保温5分钟。如果使用随机引物，则保温温度只能是25℃(5分钟)。
5．加入1μL(200U)MMLV逆转录酶，反应终体积为20μL。
6．42℃保温60分钟(但如果使用随机引物，需要先25℃保温10分钟，然后再转移到42℃保温60分钟)。
7．70℃保温10分钟以终止反应，放置在冰上待用。合成的cDNA可以直接作为PCR模板使用，不需要纯化。

二、合成建文库用的1st-strand cDNA
1．按下表配制RT反应体系:

加入物	加入量
poly(A)mRNA 或专一的RNA	1ug 0.5-1ug
注：RNA样品不能有基因组DNA污染。
Oligo(dT)18(0.5ug/μL) 或随机引物(0.2ug/μL) 或RNA模板专一性引物	1μL 1μL 100pmol
注：随机引物于RNA模板的比例跟最后得到的cDNA的平均长度成反比
RNase-free水	补水到12μL

2．70℃保温5分钟后立即冰浴。
3．严格按下表顺序加入各成分：

5×RT Buffer	4μL
RNase Inhibitor(20U/μL)	1μL
dNTP(10mM each)	2μL

4．37℃保温5分钟。对富含二级结构的高GC RNA模板，可以改成45℃保温5分钟。如果使用随机引物，则保温温度只能是25℃(5分钟)。
5．加入1μL(200 U)MMLV逆转录酶，反应终体积为20μL。
6．42℃保温60分钟(但如果使用随机引物，需要先25℃保温10分钟，然后再转移到42℃保温60分钟)。
7．70℃保温10分钟以终止反应，放置在冰上待用。合成的cDNA可以用于第二链cDNA的合成或放置在-20℃。

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货号	名称	规格
BTN131235	Klenow片段(3′→5′exo-)	200U
SV0177	BsgI限制性内切酶	250U|50U
SV0289	ClaI限制性内切酶	5KU|1KU|500U
SV0580	PacI RE-Mix限制性内切酶	25次
SV0614	PstI限制性内切酶	50KU|50KU|10KU|10KU|5KU
SV1089	核酸外切酶 T	1250U|250U
SV1525	α1-3,4,6 半乳糖苷酶	1KU|200U