特别提示：包括RNase HII在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：RNase HII
产品货号：SV1366
产品规格：1250U|250U

特性:
切刻聚合酶产物，掺入核糖核苷酸
与 T7 核酸内切酶 I 联合使用时，在掺入有核糖核苷酸区域位点处产生一个双链的缺口
降解冈崎片段或其它 RNA-DNA 杂交链中的 RNA 部分
概述:
核糖核酸酶 HII（RNase HII）为核糖核酸内切酶，适用于在双链 DNA 内部切刻核糖核酸的 5´ 末端，产生 5´ 磷酸和 3´ 羟基末端。RNase HII 还可以在冈崎片段的 RNA 部分进行多处切割。
来源:
重组 E. coli 菌株，该菌株携带来自 E. coli 的 RNase HII 基因（rnhB）和编码麦芽糖结合蛋白基因（MBP）的融合基因。亲和层析后，用 Xa 因子将 RNase HII 从融合蛋白中切割分离，然后再进行纯化去除 MBP 和 Xa 因子。从 MBP 中切割下来的 RNase HII 在其 N 端多出四个氨基酸（Ile -Ser-Glu-Phe）。
反应条件:
1X ThermoPol 反应缓冲液
[10 mM KCl，20 mM Tris-HCl，10 mM (NH4)2SO4，2 mM MgSO4，0.1% Triton X-100 (pH 8.8 @ 25℃) ]，37℃ 温育。
质保声明:
无核酸内切酶、核酸外切酶和 RNase 污染。
单位定义:
1 单位指 1X ThermoPol 反应体系中，37℃ 条件下，30 分钟产生与切刻 100 pmol 人工合成双链 RNA 底物相同的荧光信号所需的酶量。该合成双链底物在荧光探针/淬火对的淬火域附近含有单个核糖核苷。单位活性检测条件请联系我们咨询 。
浓度:
5,000 units/ml。
注意事项:
与 0.1% SDS 一起温育足以灭活 RNase HII。

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名称：Klenow片段(3′→5′exo-)
货号：BTN131235
规格：200U
Klenow片段是大肠杆菌DNA聚合酶I的蛋白水解产物。它保留了DNA聚合酶活性，具有3′→5′外切酶活性，但不具有5′→3′外切核酸酶活性。可以在DNA模板和引物存在的条件下，选择性地催化底物dNTP沿5′→3′方向合成与模板互补的DNA。本产品是重组表达得到。

产品用途：
1．双链DNA 5′突出末端的平滑化。
2．用随机引物制备探针。
3．随机引物标记法。
4．寡核苷酸定向诱变中双链DNA的合成。
5．双脱氧法DNA序列测定(Sanger法)。

产品组成：

成分	规格
Klenow片段(5U/μL)	20μl
10×Klenow Fragment Buffer	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性定义：以合成的Poly d(A-T)DNA为模板/引物，在37℃、pH7.4的条件下，30分钟内使10nmol的全核苷酸掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定义为1个活性单位。

使用举例：(随机引物的同位素标记反应)
1．在微量离心管中配制下列反应液

成份	用量
模板DNA	25ng
随机引物(6-9mer)(1nmol/μl)	2μL
补超纯水到	14μL

2．95℃保温3分钟。然后冰中急冷5分钟。
3．加入2.5μl 10×Klenow Fragment Buffer。
4．加入2.5μl dNTP(0.2mM dATP,dGTP,dTTP)。
5．加入5μl 111TBq/mmol[α-32P].dCTP(3000 Ci/mmol)(1.85 MBq，50μCi)
6．加入1μl本产品，反应液共25μl。
7．37℃反应3小时。
8．65℃加热5分钟。
 反应液可直接作为探针使用。如有必要，可以通过用我司柱式探针纯化试剂盒除去未反应的标记的dCTP。

注意事项：
1．本酶有高度稳定性，稀释时不失活，但剧烈搅拌会失活。
2．由于不含有 5′→3′的外切核酸酶活性，因此没有切口平移活性。
3．可用于双链DNA末端以及缺口的修复。
4．与T4 DNA Polymerase相比，对模板高级结构的抵抗性能较好。
5．由于对DNA的亲和性较强，过量使用易发生凝集作用从而抑制反应进行。
6．若用于5′突出末端的修饰时，补平后有时会多加一个碱基。
7．与DNA Polymerase I相同，ddNTPs的掺入不受底物抑制。

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