特别提示：包括蛋白提取液(Western)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：蛋白提取液(Western)
产品货号：HR0359
产品规格：50ml|100ml

蛋白提取液对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分均有较强裂解作用，是经典常用的细胞组织快速裂解液。蛋白提取液得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等。蛋白提取液中已含常用磷酸酶抑制剂。

储存条件：提取液室温保存。抑制剂-20℃保存。
有效期：一年。

注意事项：
1．实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。
2．整个过程须保持样品处于低温状态。

使用方法：
A．细胞裂解
1．裂解液制备：每 1ml蛋白提取液中加入2μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2．取5-10×106个细胞，在4℃，1000rpm条件下离心5-10分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
3．用冷 PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
4．每 5×106个细胞中加入500μl冷的裂解液(每106个细胞加100μl蛋白提取液。
大约相当于6孔板的每孔加入100μl～150μl，或一个75 cm2培养瓶加1～2ml。裂解液和细胞应充分接触。如果蛋白提取液不足量，细胞裂解效率将会降低)，混匀后，在4℃条件下振荡15-20分钟。
5.在 4℃，14000rpm条件下离心15分钟。
6．快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，用于下游实验。
B．组织裂解
1．裂解液制备：每1ml蛋白提取液加入2μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2．取100mg组织样本剪碎，加入1ml裂解液，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体。
3．将组织匀浆吸入另一预冷的干净离心管中，在4℃，10000rpm条件下离心5分钟。
4．将上清吸入另一预冷的干净离心管，用于下游实验。
上述蛋白提取物可分装后于-80℃冰箱保存备用。

根据您的关注的蛋白提取液(Western)，您可能还对以下产品有需求：



名称：RIPA裂解液(强中弱套装)
货号：YT612
规格：共150ml
本品是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等。RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay。RIPA裂解液的配方有很多种，根据其裂解液的强度大致可以分为强、中、弱三类。

RIPA裂解液(强中弱套装)含有RIPA裂解液(强)、RIPA裂解液(中)和RIPA裂解液(弱)各50ml，便于实验时探索不同的实验条件。

用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用百奥莱博的BCA蛋白浓度测定试剂盒(YT036/YT037)测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

产品组份：
RIPA裂解液(强)————50ml
RIPA裂解液(中)————50ml
RIPA裂解液(弱)————50ml

储存条件：-20℃，有效期一年。

名称：Tricine-SDS-PAGE凝胶制备试剂盒
货号：WE0279
规格：50次
  常规的Tris-SDS-PAGE电泳的只能分辨大分子蛋白，对于相对分子量小的，尤其是10 kD以下的蛋白分辨率极低。而Tricine-SDS-PAGE可以很好的分离分子量在1-10 kD的蛋白及多肽，成为目前电泳法变性分离多肽的主要方法。本产品包括Tricine-SDS-PAGE凝胶制备所需全套试剂，只需自备蒸馏水，即可制备高质量各种浓度的凝胶，方便、快捷，电泳后可直接用于考染、银染、Western杂交等实验。

试剂盒组成：

组份	50次
49.5%T 3%C	30ml
49.5%T 6%C	100ml
Tricine-SDS-PAGE Gel Buffer	140ml
Glycerol	30ml
APS	0.5 g
TEMED	750μl

本产品所提供的APS(过硫酸铵)为固体粉末，使用前加入纯水溶解即配制成10%APS溶液(0.5 g APS加5ml纯水)，将溶液分装后置于-20℃保存，通常半年内有效。溶液在使用中可放置4℃保存两周。

注意事项：
1、本产品所提供的APS(过硫酸铵)为固体粉末，使用前加入纯水溶解即配制成10%APS溶液(0.5 g APS加5ml纯水)，10%APS配制后分装-20度保存。APS溶液不稳定，应尽量减少室温存放时间，每次取用后立即放回冰箱，以防失效；若发现凝胶聚合时间延长，应考虑更换，使用-20℃保存的10%APS。
2、在凝胶配制过程中，尤其是液体混匀步骤，应尽量避免气泡的产生。
3、在分离胶上层加纯水时要小心操作，加水时速度不能太快。
4、具有神经毒性，操作时请穿着实验服并佩戴一次性手套。
5、本产品仅用于科研，不能用于人体实验或人体治疗。

操作步骤：

根据目的蛋白分子量大小选择合适的PAGE分离胶配制浓度，凝胶浓度配方参考附表。

I 配制分离胶
1、将不同体积的纯水、49.5%T 6%C、Tricine-SDS-PAGE Gel Buffer和Glycerol(甘油)加入到离心管中混合。
2、加入10%APS和TEMED，立即涡旋混匀5-10秒，以使溶液充分混匀。
3、在凝胶模具中迅速灌入适量分离胶溶液(对于1 mm mini-gel，分离胶溶液加约4ml)，然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-3 cm的水层，使凝胶表面保持平整。
4、静置，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。

II 配制夹层胶
去除覆盖在分离胶上的水层，用滤纸将残留的水尽量吸去。
1、将不同体积的纯水、49.5%T 3%C和Tricine-SDS-PAGE Gel Buffer加入到离心管中混合。
2、加入10%APS和TEMED，立即涡旋混匀5-10秒，以使溶液充分混匀。
3、将适量的夹层胶溶液迅速加至分离胶的上面(对于1 mm的mini-gel，夹层胶溶液加约1ml)， 然后在夹层胶溶液上轻轻覆盖一层水层，使凝胶表面保持平整。
4、静置，待夹层胶和水层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。

附表Tricine-SDS-PAGE凝胶配方表：

组份	分离胶(胶浓度/配制体积)			夹层胶 (胶浓度/配制体积)	浓缩胶 (胶浓度/配制体积)
	20%/4.5ml	16.5%/4.5ml	15.5%/4.5ml	10%/2ml	4%/2ml
49.5%T 3%C	-	-	-	0.407ml	0.16ml
49.5%T 6%C	1.82ml	1.5ml	1.395ml	-	-
凝胶缓冲液	1.5ml	1.5ml	1.5ml	0.667ml	0.496ml
甘油	0.48ml	0.48ml	0.48ml	-	-
ddH2O	0.7ml	1.02ml	1.125ml	0.926ml	1.344ml
10% AP	40μl	40μl	40μl	20μl	20μl
TEMED	5μl	5μl	5μl	3μl	3μl

III 配制浓缩胶
去除覆盖在夹层胶上的水层，用滤纸将残留的水吸去。
1、将不同体积的纯水、49.5%T 3%C和Tricine-SDS-PAGE Gel Buffer加入到离心管中混合。
2、加入10%APS和TEMED，立即涡旋混匀5-10秒，以使溶液充分混匀。
3、将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
4、待凝胶聚合后，小心地拔出梳子，以免破坏加样孔。
5、进行电泳操作。

IV 电泳
将电泳槽放入4℃或冰水浴中，外槽加入阳极缓冲液，内槽加入阴极缓冲液，30V预电泳10 min，将样品(已经过Tricine专用上样缓冲液处理)加入点样孔后30V电泳1小时，100V电泳至溴酚蓝到达胶底部后停止电泳，进行后续的考马斯亮蓝染色或电转。

储存条件：2～8℃

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货号	名称	规格
BTN81202	真菌总蛋白质微量提取试剂盒	50次
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